北京Verhoeff固定液厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京Verhoeff固定液厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京Verhoeff固定液厂家
英文名：Verhoeff Fixative Solution
编号：BTN140588
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
本产品为眼球常用固定液，主要成分为甲醛、酒精、苦味*(代"酸")。固定48h后，即可脱水。固定于Verhoeff固定液中的眼球可以长期保存。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

更多有关北京Verhoeff固定液厂家的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞
编号：BTN140378
英文名称：E.coli BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL Chemical Competent Cell
规格：10*100μl
本产品来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4 种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA)对应的tRNA(argU、ileY、proL、leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3 区(DE3 区含有T7 噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，*霉素，链霉素，壮观霉素抗性。本产品由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型为：F- ompT hsdS(rB-mB-)dcm+ Tetr galλ(DE3)endA Hte [argU proLCamr] [argU ileY leuW Strep/Specr]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
5. 为获得需要量的蛋白，ZJ诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。


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·植物RNA提取试剂盒2.0(无*仿柱式提取)
编号：BTN160907
英文名称：Plant RNA Column extraction kit 2.0
规格：50次
本试剂盒是无酚无*仿柱式植物RNA提取试剂盒(BTN160906)的升级产品。不仅不需要*仿处理，还解决了提取的植物总RNA中出现基因组DNA污染这一难题，提取的RNA通过PCR验证不含基因组DNA污染。

试剂盒特点：
1. 免酚和*仿处理，操作安全可靠。
2. 简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
3. RNA 纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
4. 目前已测试过上百种植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
膜反应液	2.5ml
RNase-free DNase(1U/μL)	0.5ml
RNA洗脱液	10ml

储存条件：常温运输，4℃保存，DNase低温运输保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNA保存液中的植物组织需用纸吸去RNA保存液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，砚磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
4.室温12000～15000g离心3～5分钟，管底沉淀为细胞破碎物。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。
6. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物，属于正常现象)，千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
7. 将一半的溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到离心吸附柱中，13000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到同一离心吸附柱中，13000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第7 步加入溶液B后有沉淀产生，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3mL。
10. 12000rpm室温离心10秒以便去除残留液体。此步很重要，否则残留的通用洗柱液会YZ后续反应中DNase的活性。
11. 将10μl(10 U)的RNase-free DNase 加入到50μl 37℃预热的DNA膜反应液中，吹打混匀配制成DNase工作液。
12. 将DNase工作液在37℃预热1分钟，然后全部加入到离心吸附柱中，室温放置5分钟。注意：5分钟一般足够降解大多数情况下的DNA污染。如果DNA 没有彻底降解(可能由于样品中残留的杂质YZ了DNase的活性)，此步的保温时间可以适当延长到10分钟或15分钟。
13. 直接在离心吸附柱中加0.7mL 通用洗柱液，盖上盖后颠倒数次混匀。
14. 12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
15. 再加0.3mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
16. 12000rpm室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇(通用洗柱液中的成分)会影响RNA的使用。
17. 将离心吸附柱转移到RNase-free 收集管中，加入30-50μl RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
18. 13000-15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
19. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
20. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
21. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。


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