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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京限制性内切酶HinfI现货,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京限制性内切酶HinfI现货
产地:国产|进口
品Pai:百奥莱博
编号:BTN17-0090
规格:2000 U
HinfI限制性内切酶识别位点:
5´...G↓A N T C...3´
3´...C T N A↑G...5´
产品组成:
成分 | 规格 |
HinfI,10U/μL | 2000U |
Buffer A,10× | 1.0mL |
Buffer B,10× | 1.0mL |
使用手册 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存。
贮存Buffer:10mM Tris-HCl(pH7.4 at 25℃),100mM KCl,1mM DTT,1mM EDTA,0.2mg/mL BSA,50% glycerol。
1×Buffer A:10mM Tris-HCl(pH8.5),10mM MgCl2,100mM KCl,0.1mg/mL BSA。
1×Buffer B:33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃),10mM 醋酸*,66mM 醋酸*,0.1mg/ml BSA。
活性定义:一个活性单位是指50μL反应体系中,37℃条件下,1小时内将1μg的lambda DNA片段完全分解所需的酶量。
热灭活:65℃加热20分钟
使用方法:1.单酶切DNA:
①在离心管中加入下列溶液:
成分 | 用量 |
nuclease-free water | 16μL |
10×Buffer A | 2μL |
DNA(0.5-1μg/μL) | 1μL |
HinfI | 0.5-2μL |
②轻柔混匀,短暂离心。
③37℃孵育1-16小时。
2.双酶切或多酶切DNA:
需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液(一般Buffer B可作为双酶切Buffer),然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
3.直接酶切PCR产品:
①在离心管中加入下列溶液:
成分 | 用量 |
PCR reaction mixture | 10μL(约0.1~0.5μg DNA) |
nuclease-free water | 18μL |
10×Buffer A | 2μL |
HinfI | 1-2μL |
②轻柔混匀,短暂离心。
③37℃孵育1-16小时。
北京限制性内切酶HinfI现货正在火爆,除此之外,为您推荐下别产品:
·OPD干粉
编号:BTN131115
英文名称:o-phenylenediamine dihydrochloride
规格:25g
OPD和HRP反应时生成水溶性橙黄色产物,在492nm时有ZD吸收峰。
储存条件:常温运输,避光保存,有效期一年。
·10×TBE电泳液
编号:BTN90313
英文名称:o-phenylenediamine dihydrochloride
规格:250mL
OPD和HRP反应时生成水溶性橙黄色产物,在492nm时有ZD吸收峰。
储存条件:常温运输,避光保存,有效期一年。
·DNA甲基化修饰试剂盒
编号:BTN130301
英文名称:Embedded Bisulfite Modification Kit
规格:150次
亚硫*(代"酸")*盐修饰DNA时要求DNA必须在单链状态,反应还必须在低温进行,常规的修饰试剂盒由于是在液相进行,要在低温下让DNA不相互复性而保持单链状态非常棘手,所以常规修饰试剂盒的修饰效率一般都不高。此外,常规方法要切换反应液,有多次沉淀步骤,使得DNA的回收率一般都不超过50%。为克服这些缺点,本公司开发出了此升级产品。
产品特点:1.用包埋的样品进行所有操作,免去所有沉淀和纯化步骤,极大简化了操作。
2.免去了DNA提取过程,所需实验材料比常规方法更少,最少几个细胞都可以,极大地节约了宝贵材料,尤其适用于珍稀材料。
3.包埋处理后,DNA在整个操作过程中都处于最适于修饰的单链状态,极大提高了修饰效率。
4.DNA包埋于包埋块中,切换反应液非常方便,而且DNA不会丢失,所以ZZ回收率都在90%以上。
5.适用于实体材料、悬浮细胞和纯化好的DNA样品。
6.本试剂盒足够制备150多个10μL包埋块(如果用纯化好的DNA)或25个10μL包埋块(如果用悬浮细胞)。
试剂盒组成: 成分 | 规格 |
包埋液 | 1.5ml |
分子生物学级石蜡油 | 25ml |
包埋块裂解液 | 12.5ml |
蛋白酶K溶液(10mg/mL) | 150μl |
溶液A | 30ml |
溶液B成分一 | 2.3 g×5棕色瓶 |
溶液B成分二 | 110mg×5棕色管 |
TE缓冲液,pH8.0 | 125ml |
说明书 | 1份 |
注: 包埋液用1.5mL旋盖离心管包装,溶液B成分一用5mL棕色瓶包装,溶液B成分二用1.5mL旋盖棕色管包装。
储存条件:低温运输、4℃保存、避免反复冻融,有效期一年。
使用方法:一、
准备试剂1.在装有2.3g溶液B成分一干粉的瓶中加入3.9mL水和0.9mL溶液A,摇晃溶解得到4.8mL溶液B成分一。在装有110mg溶液B成分二干粉的离心管中加入1mL 50℃预热的超纯水,摇晃溶解,得到溶液B成分二。将0.6mL溶液B成分二加入到4.8mL溶液B成分一中,得到5.4mL溶液B,冰上放置待用。未用完的溶液B下次不得再使用。
2.每次实验前,将装有1.5mL包埋液离心管在沸水浴上放置数分钟直到变成溶液,然后放80℃待用。
二、
对微量组织材料(如果材料足够,可先纯化DNA,再按第三方案进行)
1.用常规的胰酶消化法处理动物实体组织或培养细胞,得到浓度不超过60细胞/μL的单细胞PBS悬液。如果实验材料已经是单细胞悬浮液(如卵细胞),则PBS洗涤后直接离心沉淀,再重悬在PBS中(浓度不超过60细胞/μL)。注:本试剂盒不含本步所需相关试剂。
2.在一个2mL离心管中加入3μL细胞悬液,再迅速滴加7μL在 80℃预热的包埋液。注:不需要吹打混匀以免混合液在抢头里面凝固。
3.加入500μL分子生物学级石蜡油,将离心管在沸冰浴中放置20分钟。
4.将离心管转移到冰上放置30分钟,低温下包埋液和细胞混合液将凝固成10μL的包埋块。
5.加入500μL包埋块裂解液和5μL Proteinase K溶液,37℃保温过夜。加入的溶液比重都比石蜡油大,将会自动沉降到石蜡油下层,不需离心。
6.吸弃包埋块之外的所有溶液(包括石蜡油),用1mL TE缓冲液室温浸泡包埋块2次,每次15分钟。此步可去除残留包埋块裂解液。
7.酶切包埋块中的DNA:选定不识别PCR靶片段的内切酶(本试剂不提供该相关试剂),再用100μL选定内切酶的1×缓冲室温液浸泡包埋块15分钟,吸弃缓冲液后再加入100μL选定内切酶的1×缓冲液和50U选定的内切酶,37℃保温2小时。
8.吸弃酶切反应液,再加入500μL新鲜配制的处理液A(配制方法:100μL溶液A+400μL超纯水)室温放置15分钟,重复此步一次。此时DNA将呈单链。
9.吸弃处理液A后,用1mL新鲜配制的处理液B(注:不是溶液B,配制方法:50μL溶液A+950μL超纯水)室温浸泡包埋块5分钟。
10.吸弃处理液B,加入750μL石蜡油,然后沸水浴20-30秒,使DNA单链彻底彼此分开。
11.奖离心管转移到冰上放置30分钟使包埋块重新凝固。
12.在离心管中加入1mL预冷的溶液B,溶液B将自动沉降到石蜡油下层。继续在冰上放置30分钟。此步用于修饰单链的DNA。
13.将离心管转移到50℃放置3.5小时。
14.吸弃溶液B,用1mL TE缓冲液常温洗涤包埋块2次,每次15分钟。
15.吸弃TE缓冲液,用500μL新鲜配制的处理液C(50μL溶液A+450μL超纯水)常温洗涤包埋块2次,每次15分钟。
16.吸弃处理液C,用1mL TE缓冲液常温洗涤包埋块3次,每次10分钟.
17.吸弃TE缓冲液,所得包埋块可以在4℃保存数月待用,也可以用超纯水洗涤两次(每次15分钟)后直接用做100μL体系甲基化PCR的模板。
三、
对纯化好的DNA18.选用不识别PCR靶片段的合适内切酶酶切纯化的基因组DNA(本试剂不提供所需试剂),总体积不超过20μL,基因组DNA不超过700 ng。
19.酶切结束后,沸水浴5-10分钟灭活内切酶并变性DNA。
20.冰上放置并短暂离心数秒后,再加入4μL溶液A,50℃保温15分钟。
21.迅速加入50μL在80℃预热的包埋液,用手指快速弹击管底混匀溶液并继续放80℃待用。不要吹打混匀以避免包埋液在移液枪头中凝固。
22.在一个新的2mL离心管中,加入1mL预冷的溶液B,再加上750μL石蜡油,并将离心管放冰上预冷。
23.迅速取80℃保温的混合液10μL,用在空中滴加的方式加到上步准备的预冷的离心管中,滴加的混合液遇冷将迅速在石蜡油中形成包埋块并自动沉入管底,得到1个包埋块。注意:不要将枪头浸入到预冷的溶液中,否则包埋液将迅速在枪头内凝固。如果包埋块没有沉到管底,可以用枪头将其拨到石蜡层下面的液相中。
24.再重复上步操作6次(步骤23),共可以得到7个包埋块(约含100ng DNA)。
25.将离心管(含7个包埋块)继续放冰上30分钟进行修饰。
26.后续操作同第13-17步。
北京限制性内切酶HinfI现货关键词:HinfI Restriction Endonuclease,BTN17-0090,限制性内切酶HinfI
BL1314 Pfu DNA Polymerase
H0301 新生牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
FMOC-D-*丙*酸 QAE Sephadex A-50 86123-10-6
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004001 小牛胸腺DNA 50mg|100mg
BTN80930 微量样品核酸提取试剂盒 Tiny Sample DNA-RNAOUT
6106-21-4 Succinic acid Sidium 琥珀酸*
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F040307 小鼠IgG1抗原 Mouse IgG1
BTN130419 内毒素清除专用亲和介质 Endotoxin Removal Resin
CYB164011 羊抗人IgG(1:500~2000)-HRP
CYB167006 羊抗人IgA(α链特异)
北京限制性内切酶HinfI现货关键词:HinfI Restriction Endonuclease,BTN17-0090,限制性内切酶HinfI
PY02-195 改良Y培养基 250克
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1,3-二羟基* Ammonium bismuth citrate 132-86-5
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没食子酸正丙酯 Acetoacetanilide 121-79-9
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PY01-106 盐*(代"酸")胍 100克
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BTN100910 长效期SDS-PAGE还原剂 SDS-PAGE Reducing Agent
BTN120415 终点显色法内毒素定量试剂盒 Chromogenic End-point TAL Kit
ARB12708 大鼠磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)尿液中含量检测 Rat phosphatidylinositol antibody igg/igm,pi ab-igg/igM ELISA KIT
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F030817 BIOTIN标记兔抗狗IgG抗体 Rabbit Anti-Dog IgG*BIOTIN
CYB167082 兔抗猪IgG
ARB10461 人生长激素释放因子(GH-RF)ELISA代测服务 Human growth hormone relasing factor,gh-rf ELISA KIT
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温馨提示:不可用于临床ZL。