His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶) 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶) 是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶) 蛋白质研究
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
规格：2mL
本产品基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，本产品就是专门用于上述实验的一站式产品。

产品特点：
1.一站式套装，含所需的介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达His蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
3.变性和非变性条件均可使用，也适用于纯化包涵体中的His标记蛋白。
4. 每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供4mL浓度为50%的Ni-Agarose介质，其ZD载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质。
6. 介质为CL-6B琼脂糖，含四个Ni离子螯合基团，比只有四个Ni离子螯合基团的Ni-IDA更有效。
7. 本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成：

 

成份	规格
Ni-Agarose介质，50%	4mL
1M咪唑溶液	25mL
1M Tris-HCl pH7.9	25mL
5M NaCl溶液	25mL
溶菌酶(20 KU/mg)	30mg(A型无)
Benzonase(2U/μL)	20μL(A型无)
盐*(代"酸")胍	6g
尿素	20g
PMSF(10mg/mL)	0.5mL
亲和层析柱，6mL	1套
使用手册	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：去离子水、20%乙醇、0.45μm滤膜

使用方法：
1．将Ni-Agarose介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据His蛋白产量决定，其ZD载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质，请根据实验需要取适量的Ni-Agarose介质加入层析柱)。
2．用5倍柱体积(指填料的体积，下同)自备去离子水洗柱，共三次。
3．用5倍柱体积的新配结合液洗柱(配方如下，以10mL为例)，共三次：

成分	用量	在结合缓冲液中浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	0.2mL	20mM
1M咪唑溶液	0.1mL	10mM
5M NaCl溶液	1mL	500mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．室温5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，沉淀(约100mg)放冰上待用或放-80℃保存。用不加诱导物的菌液做对照样。
5．如果用本产品A型：加入1mL冰浴的结合液(1mL菌液需要用50μL结合液)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。如果用本产品B型：加入1mL冰浴的含溶菌酶的结合液(先取20mL结合液，加入所有30mg溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，剩余的-20℃放置)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液和1μL Benzonase，冰上放置30分钟。
6．4℃下13000-15000g离心10分钟，去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清，留样做SDS-PAGE电泳对照。如果要纯化裂解液中可溶部分的His标记蛋白，则直接进入第7步；如果要纯化裂解液中包涵体(沉淀部分)中的His标记蛋白，则直接进入第12步。

A、纯化细胞裂解液中可溶部分的His标记蛋白
7．将上步得到的上清液上柱，让重力使裂解液自然流出。如要提高His标记蛋白与介质的结合效率，可用试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。
8．用10倍柱体积结合液洗柱(配方见上表)，收集并保存穿透液(含杂质或没被吸附的His标记蛋白，可做SDS-PAGE电泳的对照)。
9．如果用一步式洗脱法(适合已经找到ZJ咪唑浓度的情况)，则直接用适量的新鲜配制的洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含His标记蛋白)。洗脱液的配方如下(以1mL体积和ZJ咪唑浓度是500mM为例)：

成分	用量	在洗脱液中的浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20mM
1M咪唑溶液	500μL	500mM
5M NaCl溶液	100μL	500mM
自备去离子水	380μL	-

10．如果用多步式洗脱(适合不知道ZJ咪唑浓度或一步式洗脱杂质多的情况)，则按上表配制一系列咪唑浓度不同(如40、60、100、200、300和500mM)，其他成分浓度不变的洗液，按从低到高的顺序洗涤并收集样品，SDS-PAGE电泳检测His标记蛋白所在的区域。
11．洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，ZH堵住层析柱下端的漏口，4℃保存待下次使用。

B、纯化包涵体中His标记蛋白
12．将第6步离心得到的包涵体沉淀重悬于1-3mL含盐*(代"酸")胍结合液中或1-3mL含尿素结合液中(建议优先使用尿素做变性剂，因为得到的洗脱液可以直接跑SDS-PAGE，而用盐*(代"酸")胍的洗脱液需先除盐后才能电泳)。冰浴1小时以使包涵体溶解，期间可轻柔摇晃几次。含变性剂的结合液配方如下(以10mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍结合液	含尿素结合液
1M Tri-HCl(pH7.9)	200μL	200μL
5M NaCl溶液	1mL	1mL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	5.7g	无
尿素(MW=60.1)	无	4.8g
自备去离子水	加水到10mL	加水到10mL

13．室温10000×g离心20分钟，沉淀为未溶解的包涵体。将上清(含溶解后的His标记蛋白)以自备的0.45μm滤膜过滤。
14．将滤过液上柱，后续纯化步骤同第7-第11步。只是所用结合液和洗脱液均含变性剂，含变性剂的洗脱液配方见下表(以1mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍洗脱液	含尿素洗脱液
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20μL
1M咪唑溶液	500μL	500μL
5M　NaCl溶液	100μL	100μL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	0.57g	无
尿素(MW=60.1)	无	0.48g
自备去离子水	补水到1mL	补水到1mL

注意事项：整个实验需避免含巯基乙醇、DTT和EDTA等成分。若洗脱液不能将His标记蛋白洗脱下来，可改用pH6.5- 4.5的pH递减的Tris-HCl洗脱。

关于His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶) 蛋白质研究的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
PY01-123  蛋黄粉  250克  
可溶性淀粉 Sodium DL-ma1ate 9005-84-9
F050302 人IgG抗体 Human IgG
亚*基二乙酸 BBOT 142-73-4
H1001 猪血浆(去红细胞、无菌过滤)
(*并三氮唑-1-基氧基)二哌*(代"啶")碳六*磷酸盐 Ceftiofur Sodium 190849-64-0或206752-41-2
BTN131094 生物素化的牛血清白蛋白 Biotin-BSA
56-45-1 L-Serine  L-丝*酸
脱氧核糖核酸(鲑鱼精) Sodium dodecylbenzenesulfonate 9007-49-2
PY02-205  Campy-Cefex琼脂基础  250克  
ARB10249 人乙酰胆碱(ACH)Elisa定量检测 Human acetylcholine,ach ELISA KIT
ARB10281 人大疱性类天疱疮抗体(BP)elisa检测 Human bullous pemphigoid,bp ELISA KIT
ARB12533 大鼠透明质酸(HA)Elisa方法检测 Rat hyaluronic acid,ha ELISA KIT
A5106-25 绵羊血清 100ml|500ml
SJ0847 豚鼠血清
BL1340 PH计电极保存液
4578-31-8 5-单磷酸腺苷 AMPNa2
2-*氧乙酸 7,8-Benzoquinoline 120-23-0
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·dATP溶液(2.5mM)
编号：BTN130912
英文名称：dATP Solution(2.5mM)
规格：2mL
dATP分子式为C10H13N5O12P3Na3,分子量是557.2，消光系数为15.2×103 M-1×cm-1(pH7.0)。λmax为259nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·DNA磷酸化试剂盒
编号：BTN130813
英文名称：DNA Phosphorylation Kit
规格：20次
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5´端一般都是-OH基团而不是-PO4基团(除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4基团)，而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5´端的-OH基团和另一个DNA分子3´端的-OH基团进行连接，因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA 之间的连接效率一般都比天然DNA 彼此的连接效率低(天然DNA 4个端口均可连接，人工合成的DNA跟天然DNA 有2个端口可以连接，人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接)，尤其是在平末端连接时。本公司开发的DNA 磷酸化产品能将DNA分子5´端的-OH基团磷酸化。

产品特点：
1.可以快速把DNA的5´端的-OH基团变成-PO4基团，使人工合成的DNA(包括PCR产物)跟天然DNA一样有高的连接效率。
2. 既可以对单链DNA进行磷酸化处理，也可以对双链DNA片段同时磷酸化处理。
3.处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。
4. 本产品足够20次DNA的磷酸化实验。
 

成分	规格
10×TPK缓冲液	50μl
ATP溶液(10mM)	100μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。

使用方法：

一：双链DNA片段(5´端为-OH基团的)的磷酸化
注意：如果是PCR产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的PCR反应液，因为其中的残留PCR引物会耗掉大量的激酶，降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

成分	用量
PCR胶回收片段	2μL(不超过10pmol)
10×TPK缓冲液	2μl
ATP溶液(10mM)	5μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超纯水到	20μl

2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟，灭活酶。
4、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。

二：单链DNA片段的磷酸化
注：单链DNA 包括局部双链的DNA。引物，linker，adaptor，Oligo探针等均按此操作处理。
5、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

成分	用量
单链DNA片段	5-10 pmol
10×TPK缓冲液	2μl
ATP溶液(10mM)	1μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超纯水到	20μl

6、37℃反应30分钟。
7、70℃热处理5分钟，灭活激酶。
8、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。如果使用浓度高，则可能需要乙醇沉淀法浓缩DNA。如果单链DNA的浓度低于5pmol，还需要在乙醇沉淀时加入核酸助沉剂。沉淀得到的DNA可溶解在适量的水中。

附：乙醇沉淀浓度DNA(本试剂盒不提供相关试剂，下列操作仅供参考：
1、在DNA溶液中加入0.1倍体积的3 M 乙酸*溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍体积的无水乙醇和4uL 核酸助沉剂。
3、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
4、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
5、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
6、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。


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·T4 RNA连接酶2(双链RNA连接酶)
编号：BTN130855
英文名称：T4 RNA Ligase 2
规格：150U
T4 RNA连接酶2 ，也被称为T4 Rnl-2(gp24.1)，同时具有 RNA 链分子间和分子内连接活性。与T4 RNA连接酶1不同的是，T4 RNA连接酶2 对双链RNA切刻的连接活性要明显高于对单链RNA的末端连接。该酶连接时需要相邻的3´羟基与5´磷酸基。同时该酶也可用于连接双链结构中RNA 3´羟基和DNA 5´磷酸基的切刻 。

产品用途：
1．连接粘性末端接头；
2．连接双链RNA中的切刻ZJ用酶；
3．可用于DNA/RNA杂交链中，RNA 3´羟基与DNA 5´磷酸基的连接；
4．无单链和双链DNA核酸外切酶、核酸内切酶、RNase以及磷酸酶的污染。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·中性亲和素蛋白
编号：BTN131090
英文名称：Nuetral Avidin
规格：10mg
中性亲和素蛋白是一种去糖基化形式的亲和素，因此对外源凝集素的结合降低至检测不出的水平，而对结合生物素的亲和性(Ka=1015M-1)没有任何损失。中性亲和素蛋白等电点为中性，这样可以避免非特异的结合。另外它表面的赖*酸残基让它可以被衍生或者进行蛋白标记。中性亲和素蛋白的分子量为60000，对生物素的特异结合能力大约为14μg/mg蛋白，接近理论ZD活性。

产品特点：
➤相比抗组*酸抗体背景更低。
➤可进行抗体剥离和重新检测。
➤ 去糖基化，将外源凝集素结合降低至不可检测水平。
➤可在组织化学中用于生物素封闭试剂。
➤ 结合能力为11-17μg生物素/mg中性亲和素蛋白。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

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