菌落PCR试剂盒2.0现货供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应菌落PCR试剂盒2.0现货供应，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：菌落PCR试剂盒2.0现货供应
编号：BTN50901
英文名：Colony PCR Kit 2.0
品Pai：百奥莱博
规格：50次
菌落PCR是筛选重组子的有效方法，可以使质粒鉴定过程从两天缩短到几小时。但由于它直接以E.coli菌落为PCR而菌落中常常含有未进入细菌的、来源于连接反应的载体DNA和插入片段，所以十分容易产生假阳性。本产品针对此缺点进行了改良。

产品特点：
1. 无假阳性率，特殊的溶菌方式能有效降低菌落中未转化DNA 对PCR的干扰，使假阳性率低于5%，远低于绝大部分同类产品。
2. 简单快速，用户只需要提供PCR引物和E.coli菌落，不需要细菌培养和质粒提取,整个筛选过程从一天缩短到2-3小时，节约时间和成本。本产品与常用E.coli菌株和载体兼容。既可小规模筛选，也适用于大规模筛查。
3.高灵敏度，既可用于高拷贝质粒，也适合于低拷贝质粒。
4. PCR反应体系中含有惰性电泳染料，反映完成后可直接上样电泳，不需另加上样液。
5.处理过的菌落样品低温长期保存后仍能用于PCR 筛查。
6. 性价比高，价格跟质粒提取试剂盒相当，但节约一天时间。

成分	规格
溶菌液A	0.5ml
溶菌液B	0.1ml
PCR 2.0	0.75ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 标记1.5mL塑料离心管，除样品管外，还必须加上阳性和阴性对照管。
在每个管中加入下列成份配制100μL 溶菌液：

H2O(自备)	88μl
溶菌液A	10μl
溶菌液B	2μl
合计	100μl

2. 用无菌牙签或无菌移液枪头从培养皿上挑取一个菌落或部分菌落，放入溶菌液中，充分震荡直到菌落彻底分散混匀。为方便回查，在培养皿上给已取样的菌落做好标记。
3. 重复第2 步直到待筛查菌落全部转移到相应的离心管中。
4.在阳性对照管中，加入已知含有待筛选质粒的菌落；如果没有此菌落，直接进入第6 步，用连接反应液直接作PCR的阳性对照。
5.在阴性对照管中，加入已知的不含有待筛选质粒的任何E.coli菌落(如常见的宿主细菌)，其他处理同第2 步。
6. 将所有离心管置于37℃保温30分钟，然后转入100℃水浴处理10分钟。振荡混匀溶液数秒后10,000 g离心1分钟，转移上清到一新的离心管中待用。此溶液为样品DNA溶液。
7. 标记与第1 步数量相同的PCR 管，每个管中分别加入下列成份并充分混匀：

样品DNA溶液	1-5μl
PCR MagicMix	15μl
引物1(10 pmol/μL)	1μl(自备)
引物2(10 pmol/μL)	1μl(自备)
Taq物DNA聚合酶(5U/μL)	0.2-0.4μL(1-2U)
补水到	30μl

 注意:引物选择有三种情况，
 一是选用商品化的能与多克隆位点两边顺序结合的通用引物(如T7、T3、SP6等)；
 二是使用用户自己合成的能与插入片段结合的引物(如果插入片段是PCR产物，引物是现成的)；
 三是组合DY种情况和第二种情况的引物。选择前两种引物在筛查到重组子后还必须用其他方法(如质粒制备后酶切或使用载体引物/插入片段引物PCR)进一步确定插入方向。选择第三种引物则可以同时完成重组子筛选和DNA 插入方向确定两项工作。用户可以根据自己的具体情况选择。
8. 将PCR 管放入PCR 仪器中进行扩增，PCR 温度参数根据引物和模板情况由客户自己预先确定。
9. PCR结束后取10μl电泳直接进行琼脂糖电泳分析。(注：本试剂盒提供的PCR buffer中已经含有电泳染料和甘油，故可以直接上样)

想要了解更多关于菌落PCR试剂盒2.0现货供应的价格、品Pai、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：

·dITP溶液(100mM)
编号：BTN130920
英文名称：dITP Solution(100mM)
规格：0.25mL
本产品纯度在98%以上(HPLC检测)，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。dITP不适合具有校正功能的聚合酶或含有校正酶的Mix催化的PCR扩增。

dITP(脱氧三磷酸次黄嘌呤核苷)，分子式为C10H12N4O13P3Na3，分子量是558.1，消光系数为12.2×103 M-1×cm-1(pH7.0)，λmax为249nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·无缝克隆试剂盒
编号：BTN160680
英文名称：Seamless Cloning and Assembly Kit
规格：25次
无缝克隆是一种简单、快速、GX的DNA 定向克隆技术，该技术突破传统，不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制，利用同源重组的原理，可将任何DNA片段克隆至任何载体的任何位点。反应及转化时间短，阳性率达95%以上。

产品特点：
1. 简单、GX地定向克隆DNA片段。
2.可同时定向克隆两个或多个DNA片段。
3. 不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制。
4. 省时，反应时间加转化时间短至20分钟。
5. PCR产物(仅有目的条带、无非特异条带和引物二聚体)可直接进行重组反应，无需纯化。

试剂盒组成：

成分	规格
2×Seamless Mix	125μl
阳性对照DNA片段I	10μl
阳性对照DNA片段II	10μl
阳性对照线性化载体	10μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. 线性化载体的制备：
 可通过单酶切、双酶切或PCR扩增的方法来制备。(如果线性化不彻底，将会导致阴性克隆的产生，推荐使用双酶切或PCR扩增的方法。)
2. DNA片段的制备：
 1)DNA片段可通过PCR扩增或酶切的方法制备，PCR扩增片段无需纯化即可用于重组反应。
 2)PCR扩增法引物设计原则：
  A.引物的3´端必须包含18-50个能与模板DNA 结合的碱基序列，以便PCR扩增出目的DNA片段。
  B.引物的5´端必须包含15-80个与线性化载体末端同源的碱基序列，以便PCR扩增片段能与线性化载体进行重组反应。
3. 重组反应：
 1)按照如下体系操作：
 2)50℃反应15分钟，然后将离心管放置于冰上。如当天不进行转化实验，请将连接产物放-20℃保存。
 注：线性化载体建议使用20-60 ng，DNA片段按照与线性化载体摩尔比3：1使用。
4.转化：
 1)取5μl连接液至50-100μl 刚刚融化的感受态细胞中，轻轻混匀，冰浴2-30分钟。
 2)42℃水浴热激30秒。
 3)立即放置于冰上静置2分钟。
 4)加入300-500μl 无菌SOC或LB培养基(不含抗生素)，37℃，200-250rpm 振荡培养60分钟。
 5)吸取 200μl菌液涂板，为得到更多克隆，可先3000 g离心2分钟，弃掉部分上清，用移液器轻吹菌体，至充分悬浮，取全部菌液涂板，然后37℃培养过夜(12-16小时)。
5. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。
6. 阳性对照反应(可选)
 将本试剂盒提供的阳性对照DNA片段和线性化载体按如下体系操作：
阳性对照DNA片段I(600bp，20 ng/μL)

或阳性对照DNA片段I(900bp，30ng/μL)

1μl
阳性对照线性化载体(2.8kb，30ng/μL)	1μl
2×Seamless Mix	5μl
超纯水	3μl

 50℃反应15分钟，然后按照步骤4转化涂板后用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定阳性重组子。


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·ATP依赖的DNase
编号：BTN120510
英文名称：ATP Dependent Dnase
规格：200U
在含有ATP的Buffer反应体系中，本产品能够特异性地水解线性双链DNA产生脱氧核糖核酸，但对环状双链DNA不起作用。本产品可用于除去质粒或粘粒等环状DNA样品中残留的少量线性基因组DNA片段的污染，减少对后续实验的影响。在基因工程实验中，制备的质粒和粘粒，即使是通过*化铯/*乙锭梯度离心方法或其它严格的方法制备，也常含有碱裂解操作过程中带来的少量细菌基因组DNA片段的污染，尤其在制备低拷贝克隆载体的质粒或粘粒等时，这种现象更为明显，使用本产品即可以有效的去除这些污染。

产品特点：
1．使用本制品可以有效除去样品中的基因组DNA，然后通过70℃、5 min的加热处理即可使酶完全失活，从而减少基因组污染物对质粒或粘粒等的常规分析、亚克隆和序列测定等后续实验结果的影响。
2．此产品可用于低拷贝的质粒或粘粒的提取及除去质粒等环状DNA中线性基因组DNA污染物。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以线性化的pMD18 DNA为底物，在1mM ATP存在、pH9.4缓冲液中，37℃反应30分钟，催化生成1nmol脱氧核苷酸所需要的酶量，定义为1活性单位。在10μL反应体系中，加入本产品0.2 U，10×ATP依赖的DNA酶Buffer 1μL，0.2μg的线性化的pMD18 DNA，在37℃条件下反应30分钟，能够使线性化的pMD18 DNA产生95%以上的降解作用。

使用方法：
使用本产品除去 pUC18质粒中含有的大肠杆菌基因组DNA片段污染物(占60%)，可以提高阳性克隆的比率。

1．在微量离心管中配制下列反应液：

成分	样品	对照
10×反应Buffer	1μL	1μL
pUC18质粒DNA混合物	1μg	1μg
ATP依赖的DNA酶	2U	-
dH2O	Up to 10μL	Up to 10μL

2．37℃反应2小时。长时间反应效率有下降的倾向，建议反应时间1～2小时。
3．70℃加热5分钟，使ATP依赖的DNA酶失活。
4．在微量离心管中制备下列酶切反应液：

成分	用量
10×H Buffer(客户自备)	1μL
第3步反应液	5μL
EcoR I(客户自备)	30U
dH2O	Up to 10μL

5．37℃反应1小时之后，进行60℃ 15 min反应，使EcoR I失活。
6．在微量离心管中制备下列连接反应液：

成分	用量
10×T4 DNA Ligase Buffer(客户自备)	1μL
第5步酶切反应液	2μL
T4 DNA Ligase(客户自备)	350 U
dH2O	Up to 10μL

7．16℃反应1小时。

取上述连接反应液2～10μL，转化到JM109感受态细胞中，涂平板培养，进行蓝白菌落筛选并计数。实验结果表明，使用ATP依赖的DNA酶处理的pUC18质粒DNA混合物(含60％大肠杆菌基因组DNA片段)的自连结果中，白色菌落减少80%以上，有效YZ了大肠杆菌基因组DNA的污染。



菌落PCR试剂盒2.0现货供应关键词：Colony PCR Kit 2.0,菌落PCR试剂盒2.0,BTN50901


·Southern专用DNA Marker(DIG标记)
编号：BTN120654B
英文名称：Southern DNA Marker(Labeled by DIG)
规格：20次
本产品是用DIG标记的lambda/Hind Ⅲ DNA Marker，可以用做Southern杂交的Marker，便于准确确定杂交片段的大小。

产品特点：
1. 即开即用，非常方便。
2. 每个DNA片段显色强度均匀。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 按常规方法制备琼脂糖胶和酶切基因组DNA。
2.上样。在胶的两侧的加样孔中各加入10μL本产品。
3. 按常规方法电泳。
4. EB或其他染料染色后UV 观察结果。
5.转膜。
6. 按常规的方法杂交和检测DIG的方法检测。

北京百莱博科技有限公司是克隆与表达产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购菌落PCR试剂盒2.0现货供应。