北京cDNADY链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)厂家

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名称：北京cDNADY链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)厂家
产地：国产|进口
英文名：1st-Strand cDNA Synthesis Kit
编号：BTN60906
本试剂盒提供合成cDNADY链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)GX合成mRNA的全长cDNA拷贝。

产品特点：
1. 使用突变的反转录酶，内源RNase H活性低。
2. 最长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA 均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV(含RI)	100μl
RT Buffer(含dNTP)	300μl
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL)	50μl
Random Primer(0.2μg/μL)	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：合成PCR用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系：

RNA 模板
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500ng
或专一的RNA	0.01pg-500ng
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。

引物

Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA 模板专一性引物	15-20 pmol
注意：随机引物与RNA 模板的比例跟cDNA 合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA 模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟。
5. 加入2μL MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。

二：合成建文库用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系:

RNA模板
poly(A)mRNA	1μg
或专一的RNA	0.5-1μg
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA模板专一性引物	100 pmol
注意：随机引物于RNA模板的比例跟cDNA合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟)。
5. 加入2μl MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。

三：用对照模板合成cDNA(需要用同位素，需要对照的客户需要单独跟我司联系)
1. 按下表配制RT反应体系:

对照RNA模板(0.5μg/μL)	2μl 引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或对照专用引物	2μl
RNase-free水	补水到13μl

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μL RT Buffer(含标记dNTP，本试剂不提供)。
4. 37℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃。
5. 加入2μL MMLV 逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7. 加1μL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上，电泳一般能出现1.1Kb的片段(如果使用随机引物，将出现多个小片段)。

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·乙酰胆碱酯酶染色试剂盒(亚铁*化铜法)
编号：BTN160681
英文名称：Acetyl cholinesterase Staining Solution Kit
规格：2×50mL
本产品的染色原理是乙酰胆碱酯酶水解碘化乙酰硫代胆碱，释放乙酸和硫代胆碱。硫代胆碱中的硫*基(-SH)把铁化*还原为亚铁化*，后者与铜离子结合形成不溶性的红棕色至深棕色的亚铁*化铜沉淀在酶活性部位而显示出来。

胆碱酯酶属于特异性酯酶，可分为两大类。一类是乙酰胆碱酯酶又称为真性胆碱酯酶，能水解乙酰胆碱，起到生理的调节作用；另一类为胆碱酯酶，又称假性胆碱酯酶，能水解胆碱的酯而不能水解乙酰胆碱酯。AChE 主要存在于神经元的胞质内、神经与肌肉接头处即所谓运动终板处；PsChE 主要存在于血浆、、唾液腺内。

产品特点：
➤ 操作简单、酯酶的扩散较少。
➤可用于观察神经和周围神经纤维等疾病情况下的改变。
➤ 有机农药中毒时可使该酶受到YZ，酶的活性下降而呈阴性反应。

试剂盒组成：

成分	规格
成分A1	25mg
溶液A2	5ml
溶液A3	35ml
溶液A4	5ml
溶液A5	5ml
溶液A6	1ml
溶液B	50ml
溶液C	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，4℃避光保存(其中溶液A2 需常温保存，溶液A6 需-20℃避光保存)，有效期半年。

使用方法：
1．冰冻切片，厚6μm，不固定或置于遇冷的10%甲醛*固定液中固定10分钟。
2．蒸馏水洗 3次，每次1分钟。
3．配制溶液A 混合液：临用前，取A2 加入A1中，使后者完全溶解，得到A12 混合液。取适量的溶液A12 混合液、溶液A3、A4、A5、A6，按1：7：1：1：0.2 比例充分混匀，即可得到溶液A混合液，6小时内使用。
 注：如果想显示AChE和ChE，即无需区分AChE和ChE，无需加入溶液A6。
4．切片加入到预温的配制好的溶液A混合液中，37℃避光孵育1～3小时(一般不超过6小时)，至切片呈淡棕色时取出。
5．蒸馏水冲洗，镜下观察如活性部位仍较淡，可于蒸馏水洗后再进行孵育，至反应合适为止。
6．流水冲洗 5分钟。
7．滴加溶液B 浅染细胞核3～5分钟。
8．流水冲洗 10分钟。
9．常规脱蜡透明，中性树胶封固。
10．染色结果：AChE酶活性部位为红棕至深棕色，细胞核为蓝色。

阴性对照(可选步骤)
取配置好的溶液A混合液，按溶液A混合液:溶液C=50:1比例充分混匀得到溶液AC混合液。取相同切片加入溶液AC混合液中，其余操作同上，染色结果呈阴性反应。

注意事项：
1．本染色液适用于冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间。
2．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


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HC0145 湿盒避光
BTN3671 血液DNAOUT Blood DNAOUT
ARB10034 人I型前胶原C末端肽(CICP)检测服务 Human cross-linked c-teloPeptides of type i collagen,cicp ELISA KIT
9012-36-6 Agarose L.M.P  低熔点琼脂糖
M0103 TMB单组份显色液                  
橙黄Ⅰ Glycylglycine 523-44-4
PY01-181  灿烂绿  BS  5克  
ARB11642 人弹性蛋白酶(ElAstAse)Elisa定量检测 Human elastase ELISA KIT
ARB12379 大鼠乳腺癌标志物-CA153含量检测 Rat mammary carcinoma marker-ca153 ELISA KIT
HC0095 离心管(圆底高速)
BTN130531 组织培养专用蛋白酶YZ剂 Protease Inhibitor for Tissue Culture
丙二酸*一水物 DEAE Sephadex A-50 26522-85-0
PY02-237  精*酸葡萄糖斜面琼脂  100克  
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·印迹膜抗体稀释液
编号：BTN81208
英文名称：Antibody Dilution Buffer
规格：250mL
本产品用于稀释Western Blot抗体，即开即用，方便快捷。

产品组成：

成分	规格
抗体稀释液成分一	100ml
抗体稀释液成分二	0.5g
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、转膜(湿法电转移，本产品不含相关试剂)
1．制备湿法电转液：将湿法电转液干粉全部溶解在1L去离子水中得20×湿法电转液，用时用去离子水稀释20倍预冷待用。
2．根据PAGE胶的大小剪切同样大小的滤纸和各边都大1mm的硝酸纤维素膜(以下简称膜)。避免手直接接触膜。
3．将切好的膜浸泡在新鲜稀释的1×湿法电转液(下简称转移液)中15-20分钟。
 注意：用镊子夹住膜的一边轻轻置于转移液上，只让膜下层不转移液接触，通过毛细管作用使整个膜浸湿。避免让膜沉入转移液中，否则膜不转移液之间形成的气泡会阻止膜的湿润。
4．在容器中将两块海绵垫、六层滤纸用转移液浸湿。
5．在转移夹上依次放上一张浸湿的海绵垫、三层浸湿的滤纸、一块PAGE胶(只要分离胶部分)、一张浸湿的膜、三层浸湿的滤纸、一张浸湿的海绵垫。
 注意：每叠加层一定要用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。膜两边的滤纸JD不能相互接触，否则电转移时会发生短路，烧坏装置。
6．合起转移夹幵放入转移槽中(一定要注意方向，转印带负电荷的蛋白质时电极方向是膜正胶负；转印带正电荷的蛋白质时，电极方向是膜负胶正)，然后用预冷的转移液灌满转移槽。
7．插上电极，一般在冷却条件下用100V恒压转移30-60分钟或冷室中14V转移过夜。
 注意：一定要检查电流的大小，电流一般在0.1-0.4A。应根据蛋白分子量的大小确定转膜时间，对于小分子量的蛋白，转膜时垫2张或更多张膜(最多可10 张)，即使白质已经转过了DY张膜，还会在其它膜上检测到；对于大分子量的蛋白，转膜时电压要高一点，时间也要延长一点，开始也用两块或多张膜。转移时间长的时候特别要注意加强降温措施。如果目的蛋白转移效率低，可以在转移液中加终浓度为20%的甲醇或0.1%的SDS。
8．终止转移后，取出膜，幵在膜上剪去一个小角以标记方向。如有必要可用自备的各种染液对胶或膜进行染色以确定蛋白质转移效率。

二、封膜(本产品不含相关试剂)
1．将膜转移至杂交袋中，加5-10mL Western封膜液后热密封杂交袋开口。
2．室温下用脱色摇床摇动杂交袋30-60分钟。

三、与一抗二抗结合
1．用5mL Western抗体稀释液(配制方法：将抗体稀释液成分二干粉到入成分一溶液中，溶解后即可。未用完的抗体稀释液需-20℃保存)将自备的一抗稀释至适当的倍数(一般需要稀释10-100000倍使用，ZJ稀释倍数跟一抗效价相关，需摸索)。
2．剪开杂交袋的一角，倒去封膜液，加入5mL新鲜稀释的一抗溶液，加热密封杂交袋开口。
3．室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟。
4．用抗体稀释液将自备的HRP或AP标记的二抗稀释至适当浓度(一般需要稀释500-4000倍。ZJ稀释倍数跟二抗效价相关，需摸索)。
5．剪开杂交袋的一角，倒去一抗溶液(可留存)，加入5mL新鲜稀释的二抗溶液，加热密封杂交袋开口。
6．室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟，也可过夜孵育。
7．剪开杂交袋的一角，倒去二抗溶液(可留存)。
8．剪开杂交袋，用镊子取出膜，用Western洗膜液在器皿中洗3次，每次10分钟。
9．根据二抗的标记酶选择下面两种显色方法之一。

四、HRP显色检测(对HRP标记的二抗，本产品A型，本产品不含相关试剂)
1．将膜平放，在吸附了抗原抗体的一面加入100-500μL TMB溶液A和100-500μL TMB溶液B，铺满整个膜表面(具体用量可按膜的大小增减)。
2．置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分钟，直至深蓝色条带出现。
3．用镊子夹起膜，放入去离子水中洗膜3次终止反应，每次30分钟。
4．空气中晾干后照相保存。
 注意：膜显色后的颜色在数小时后将会褪色，不能存在，故需要及时照相。

五、AP显色检测(对AP标记的二抗，本产品B型，本产品不含相关试剂)
1．用新鲜配制的1×AP缓冲液洗涤硝酸纤维素膜5分钟。
2．将膜转移到新配制的BCIP-NBT法AP显色液中，每cm2膜需要0.1mL显色液。新鲜配制BCIP-NBT法AP显色液(以10mL为例)的方法：将9mL去离子水、1mL 10×AP缓冲液、50μl BCIP溶液和50μl NBT溶液混匀。此溶液必须在1小时内使用。
3．室温摇晃5-30分钟显色(37℃可加速反应)。
4．显色到合适程度后用自备去离子水洗膜3次终止反应，每次30分钟。
5．用吸水纸吸干膜上的水分，避光干燥保存或在一周内照相。

六、Western抗体清除剂(说明：此处理可能会使蛋白质失去某些表位，本产品不含相关试剂)
1．将膜浸泡在Western抗体清除剂中，70℃摇晃孵育30分钟，去除一抗和二抗。用Western洗膜液洗膜两次，每次10分钟。
2．膜即可用于下一次Western检测的膜封堵步骤。

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