随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 探针标记及检测

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 探针标记及检测，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 探针标记及检测
产地：国产|进口
英文名：Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)
品Pai：百奥莱博
规格：5次
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。

产品特点：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速，最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素，可以达到109cpm/μg DNA)，检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的，长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择，其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记，但需自备标记底物；BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记，不需自备标记底物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×A型标记反应液(自备标记物型)	50μl(仅A型有)
2×B型标记反应液(生物素型)	50μl(仅B型有)
2×C型标记反应液(DIG型)	50μl(仅C型有)
dATP,2mM	10μL(仅A型有)
dTTP,2mM	10μL(仅A型有)
dGTP,2mM	10μL(仅A型有)
dCTP,2mM	10μL(仅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×标记反应液(ABC三种之一)	10μl
超纯水	补水到15μl

注意：非同位素标记物由于疏水性强，容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合，所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好，因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交，竞争性地YZ探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟，或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性，立即放冰上待用。注意：如果PCR仪器不能设置到100℃，99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：

试剂盒类型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水

注：上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM，dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例为65:35)。由于空间阻碍，并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高，一般dTTP与标记dUTP的比例在65：35为ZJ。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的ZJ比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活为3000Ci/mmol，浓度为好为10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关，具体见下表：

模版DNA用量	1小时后探针合成量	20小时后探针合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。
 注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针，由于其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。

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·胰蛋白酶(质谱级)
编号：BTN131029
英文名称：Trypsin，MS Grade
规格：100μg
胰蛋白酶是丝*酸蛋白酶，可特异性地切开赖*酸和精*酸残基的羧基端。胰蛋白酶这种严格的特异性是蛋白质鉴定的基础。天然胰蛋白酶易于自我水解，产生假胰蛋白酶，后者特异性较广，含有胰凝乳蛋白酶样活性。存在于胰蛋白酶制剂中的这些自我水解产物能产生多余的肽片段，从而干扰质谱检测到的片段的数据分析。

本产品是质谱分析级胰蛋白酶，其能提供ZD限度的灵敏度。胰蛋白酶中的赖*酸残基已经过还原甲基化修饰，成为活性高且稳定的分子，抗拒自我水解的性能特别强。纯化的胰蛋白酶的特异性又由于TPCK处理使胰凝乳蛋白酶失活而进一步提高。处理过的胰蛋白酶经过亲和层析纯化，制成冻干粉。本产品能够用于胶内消化、溶液中酶解和质谱分析等实验。

产品特点：
➤ 纯度高，使用TPCK处理过，并经亲和纯化得到。
➤产品质量稳定，每批都经过质谱检测。
➤ 方便使用，以小瓶提供。
➤ 价值高，保证5次冻融循环后，性能稳定，这样使残余试剂量最小。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。干粉溶解在50mM醋酸中后，-20℃保存。若要长期储存，将溶解的胰蛋白酶存于-70℃。将冻融循环限制在5次以内。

使用方法：(溶液中酶解实验举例)
1．将目的蛋白溶解在6M guanidine HCl(or 6～8M urea or 0.1% SDS)，50mM Tris-HCl(pH8)，2–5mM DTT(or β-mercaptoethanol)的溶液中。
2．95℃加热15–20分钟或者60℃加热45–60分钟，自然冷却。
3．分析变性蛋白质时，加入50mM NH₄HCO₃(pH7.8)or 50mM Tris-HCl，1mM CaCl₂(pH7.6)，使guanidine HCl or urea终浓度至少为1M。如果上步已经加入SDS，可以不加入NH4HCO3。分析非变性蛋白质时，将蛋白样品溶解在pH为7-9的缓冲液内即可。
4．加入胰蛋白酶，使胰蛋白酶：蛋白质=1:100～1:20(w/w)。37℃孵育至少1小时。将反应体系移至-20℃或者加入胰蛋白酶YZ剂TCA(终浓度10%)终止酶反应。也可以将反应溶液的pH降到4.0以下，终止酶反应。
5．反相HPLC或者SDS-PAGE分析酶解反应结果。


随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 探针标记及检测关键词：随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒,BTN90603B,Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)


·地高*(代"辛")标记dUTP溶液(Digoxin-11-dUTP)
编号：BTN100921
英文名称：Digoxin-dUTP Solution
规格：25μL
本产品是浓度为0.35mM的DIG-11-dUTP。用于PCR、缺口平移、cDNA合成、随机引物标记和引物延伸等标记DNA。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

·Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL)
编号：BTN100814
英文名称：Oligo dT12-18 Primer
规格：5μg
Oligo(dT)12-18为长度在12到18之间的Oligo(dT)混合物，可以用于以带polyA尾巴的RNA为模板的DY链cDNA合成。建议每20μL反应体系使用0.5μg oligo(dT)。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

·乙醇-甲醛固定液
编号：BTN131281
英文名称：A-F Fixative Solution
规格：250mL
本产品为乙醇-甲醛混合固定液，本固定液兼有固定和脱水作用。在临床活检中，因为时间要求快，导致固定时间较短，固定不充分，特别适合使用本产品。也可以在脱水步骤用本产品替代75%乙醇。本产品适用于皮下组织中肥大细胞的固定，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。


·植物RNA提取专用高盐溶液
编号：BTN140402
英文名称：High-Salt Solution for Precipitation (Plant RNA extraction)
规格：250mL
植物RNA溶液中常富含多糖、多酚，会阻碍和影响后续实验。本产品主要用于去除植物RNA溶液中的多糖、多酚。向已经提取的植物RNA溶液中或在使用植物RNA提取试剂盒(产品编号:BTN3080)提取植物RNA过程中加入本产品，再经过异丙醇沉淀，可以达到去除多糖、多酚的目的，得到高纯度的RNA。本产品具有下列特点：
1. 本产品不含DNase和RNase。
2. 经本产品处理后的RNA纯度高，可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
3. 本产品不能用于小分子量RNA中多糖、多酚的去除，会严重影响小分子量RNA的回收率。
4.在处理微量RNA样品时，在去除多糖、多酚的同时，RNA损耗也较大，此时可以添加百奥莱博产品微量核酸沉淀剂(BTN50903)以提高回收率。

使用及效果：
取RNA样品0.5倍体积的本产品与RNA样品溶液混匀，加入等体积异丙醇，室温放置10 min，12000rpm，4℃离心10 min，弃上清。加入1mL经RNase-free水配制的预冷的75％乙醇，12000rpm，4 ℃离心5 min。弃上清，室温干燥沉淀片刻。加入适量RNase-free水或TE Buffer溶解沉淀。



随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 探针标记及检测关键词：随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒,BTN90603B,Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)

6976-37-0 双(2-)亚*基三(羟甲基)甲*(代"烷") Bis-Tris
HC0133 擦镜纸
PY08-045  缓冲蛋白胨水 225ml  瓶，用于沙门氏菌前增菌用
ARB10574 人成纤维细胞生长因子18(FGF-18)酶联免疫定量检测 
BTN130831 丝状真菌线粒体DNAOUT Filamentous Fungal mtDNAOUT
F030825 BIOTIN标记兔抗豚鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Guinea Pig IgG*BIOTIN
9007-34-5 Collgen TypeⅡ  胶原蛋白Ⅱ型(牛)
BL1426 5×TBE 缓冲液
9014-01-1 碱性蛋白酶(1：200000)
BL1053 MRS肉汤
BTN60101  Ampicillin Powder
ARB10022 人5核苷酸酶(5-NT)ELISA代测服务 Human 5-nucleotidase,5-nt ELISA KIT
甘*酸* Berberine hydrochloride 14783-68-7
ARB10759 人抗BB抗体(BB-Ab)Elisa方法检测 Human anti-b burgdorleri antibody,bb-ab ELISA KIT
91079-40-2 Casein Enzymatic Hydrolysate  酶水解酪素
甘*酸* Leucine Dehydrogenase 6000-44-8
9048-46-8 牛血清白蛋白Ⅴ Albumin BovineⅤ

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