DAB法显色试剂盒(小鼠IgG)供应

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名称：DAB法显色试剂盒(小鼠IgG)供应
规格：1盒
产地：国产|进口
英文名：Western Blotting Mouse IgG DAB Chromogenic Reagent Kit
品Pai：百奥莱博
编号：QN1162
本试剂盒主要用于western blotting的DAB显色，含有抗小鼠IgG酶标二抗。

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。

试剂盒组分：
封闭试剂————————————30g
10倍浓缩抗体稀释液———————50ml
酶标二抗————————————0.5ml，效价1:500～3000
20倍DAB浓缩显色液-———————5mlA+5mlB。

常规电泳转膜后:
1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T 漂洗3 次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2) 按5g 封闭试剂加100ml 双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次5min。
3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml 双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4) 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5) 用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次5min。
6) 用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量，按10ml 抗体稀释液加入10ul HRP 标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7) 用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次10min。
8) 配制DAB 显色：根据用量，取TBS-T 4ml，加入DAB 显色液A、DAB 显色液B 各200ul，混匀，加在膜正面，室温下显色。在目标条带显出后，而且背景未出时，放入水中终止显色。

注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。
2. western blotting DAB显色法操作简单，但其敏感性与ECL发光发有一定的差距，一般只适用于丰度较高的蛋白。
3. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长ZZ漂洗次数与时间。如果条带过弱，可延长抗体孵育时间。
4. 如果完全没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程， 如果确认无误，反复两次依旧无结果，请换用ECL发光法显色。
5. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml 的双蒸水溶解，用盐*(代"酸")调PH 到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

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·封闭绵羊血清(原液)
编号：QN1243
英文名称：Normal Sheep Serum
规格：10ml
封闭血清适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭。可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点，另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点，阻断抗体与样品中的Fc受体结合，从而降低背景，减少假阳性。在选择封闭血清时，要注意封闭用血清中不能含有目标蛋白，且封闭血清来源不能与一抗来源相同，可用与二抗相同来源的封闭血清。

使用方法：
使用时，用PBS(0.01mol/L pH7.2-7.4)将封闭血清原液稀释10或20倍，配成10%或者5%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30分钟，清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。

储存条件：-20℃

·氧化型低密度脂蛋白
编号：QN0279
英文名称：OX-LDL
规格：2mg
人源性低密度脂蛋白(通过超速离心分离(1.019-1.063g/cc)纯化)在PBS溶液中用5μM Cu2SO4 (氧化剂)37℃ 氧化 20 小时所得。ZZ通过加入过量EDTA-Na2终止氧化反应。通过琼脂糖凝胶电泳对不同的LDL的迁移率进行分析。氧化型LDL的迁移速度是普通LDL的2倍。这种氧化型的LDL被广泛用于研究类脂化合物代谢作用，但细胞凋亡诱导实验除外。细胞凋亡诱导可选本公司所产高氧化程度低密度脂蛋白进行实验。


浓度：2.0mg/ml(蛋白质)

包装：经膜过滤后在PH为7.4，含有1μM EDTA-Na2的PBS溶液中无菌保存;

来源：铜离子氧化人源血浆LDL;

稀释方式：PBS磷酸盐缓冲液或细胞培养液;

储存条件：2～8℃保存，切勿冻存！有效期为6周。

注意事项：长时间的储存后可能会产生沉淀，这种现象属于正常情况。将溶液放入离心管中离心2分钟将聚合物除去即可。氧化型LDL不稳定，实验时现用现配，采用新鲜配置工作液。


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