MTT细胞增值与毒性检测试剂盒 细胞凋亡与增殖

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MTT细胞增值与毒性检测试剂盒 细胞凋亡与增殖由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多MTT细胞增值与毒性检测试剂盒等细胞凋亡与增殖产品请联系我司咨询订购。

名称：MTT细胞增值与毒性检测试剂盒 细胞凋亡与增殖
品Pai：百奥莱博
英文名：MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
编号：QN1308
MTT可以被线粒体内的一些脱*酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan，在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解，然后通过酶标仪可以测定490nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高;细胞毒性越大，则吸光度越低。

使用说明：
1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，每孔180μL，3000-10000个细胞/孔。
2.置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁，培养6-24小时。
3.加入适当浓度的受试化合物，继续培养适当时间。
4.小心吸去上清，加入90μL新鲜培养液，再加入10μL MTT溶液，继续培养4 h。
5.然后吸掉上清，每孔加入110μL Formazan溶解液，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光值。
6.同时设置调零孔(培养基、MTT、 Formazan溶解液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、 Formazan溶解液)，每组设定3复孔。

注意事项：
1.由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液;另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
2.MTT溶液为黄色需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃

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8008-63-7 牛胆粉
PY08-020  玉米吐温80琼脂平板 9CM  10皿/盒，用于霉菌的培养
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E0609 抗凝裂解大牛血(无菌)
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SJ0673 TMB显色液A
BTN131233 零背景T载体 Zero Background T Vector
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ARB13221 小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)酶标法分析 Mouse advanced glycation end products,ages ELISA KIT
5-羟基-DL-色*酸 IDA 56-69-9
ARB10618 人血纤蛋白原降解产物(FDP)Elisa分析 Human fibrinogen degradation product,fdp ELISA KIT
克拉霉素 Potassium pyrophosphate 81103-11-9
ARB11780 人新型隐球菌抗原(CN)酶联免疫定量检测 
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·G418遗传霉素硫*(代"酸")盐
编号：QN0062
英文名称：Geneticin；G-418 Sulfate
规格：100mg
本品是真核表达筛选用抗生素，可以用于筛选表达特定抗性基因的稳定细胞株。筛选哺乳动物细胞，推荐起始筛选浓度为400微克/毫升;筛选植物细胞，推荐起始筛选浓度为10微克/毫升;筛选酵母，推荐起始浓度为500微克/毫升。根据起始浓度的效果可以再适当升高或降低G-418的使用浓度。

CAS：108321-42-2
分子式：C20H40N4O10·2H2SO4
分子量：692.71
储存条件：2～8℃
性状：白色粉末。
溶解性：可溶于水、甲醇、缓冲液和培养基。溶解后，0.22μm过滤CJ，分成小包装，4℃可保存12个月，-20℃保存时间更长。最常用的储存液使用100mMHEPES(pH7.3)配制，浓度为50mg/ml。使用HEPES配制的好处是加入储存液不会改变培养体系的pH值。


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·辣根过氧化物酶
编号：QN0478
英文名称：Peroxidase
规格：10mg|100mg|1g
辣根过氧化物酶是一种具有氧化还原酶性质的血红素蛋白，是酶标记法所用的一种主要酶，也可用于生物液体中葡萄糖和半乳糖的测定。

别名：HRP;POD
CAS号：9003-99-0
储存条件：-20℃
酶活：230～300units/mg
性状：棕褐色结晶或冻干粉
分子量：44000

HRP由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成，中性糖和*基糖约占18％，主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一个HRP分子中含一个*化血红素IX作辅基，该辅基在403nm波长处有ZD吸收峰，而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有ZD吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比，也就是所谓的RZ(Reinheits Zahl)值。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量，并非表示HRP制剂的真正纯度，而且RZ值高的HRP制剂，并不意味着酶活性也高。但可以一纯酶溶液在10mm光径403nm波长下的吸光度来计算酶浓度[1％(W/V)酶溶液吸光度为22.5，浓度为227umol/L]。纯HRP使用1.36 mol/L甘油、10mmol/L磷酸*、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L细胞色素C(pH 7.4)溶液作为基质冷冻保存，可使酶结合物稳定数年。

HRP稳定性：
HRP对热及有机溶剂的作用比较稳定，用甲*与石蜡切片处理或用纯乙醇或l0％甲醛水溶液固定做冷冻切片，均不能使其活性改变。

HRPYZ剂：
*化物或硫化物在1～10μM浓度时具有可逆性地YZHRP的作用;
*化物、叠氮化合物或羟胺仅在高于1mM浓度时YZHRP;
HRP还可被羟甲基过氧化*不可逆地YZ;
强酸也是HRP的强烈的YZ剂。

因此，在酶免疫测定常选用上述的某些化合物如*化*、叠氮*和强酸等作为酶反应的终止剂。此外，在配制酶免疫测定的稀释缓冲液时，为防止酶失活，应避免使用叠氮*作防腐剂。HRP的同工酶主要可分为三种类型：
①含糖量高的酸性同工酶。
②等电点接近于中性(或微碱)的含糖量相对较低的同工酶。
③含糖量低的碱性(PI>11)同工酶。

酶免疫试验中所使用的HRP，以PI为8.7～9.0的所谓“C”同工酶为主要组成成分，其他同工酶的活性则很低。“C”同工酶的共价结构由2个密切接近的区域组成，血红素基团则位于其间而成夹心结构，糖链以8个不同的部位结合于多肽。天然的酶所带的纯电荷极少;无游离的。—*基，仅有2个可测出的组*酸，6个赖*酸似乎全被糖链外壳所遮盖。因此，HRP一般仅有1～2个可用于耦联的*基。

根据HRP的催化特性，ELISA中一般使用过氧化*(H2O2)作为HRP底物之一，在供*体(即色原底物)存在时，HRP与H2O2的反应迅速而又专一。由图4可见，HRP被H2O2二价地氧化形成复合物I，而复合物I又可与*供体的二步连续的单价相互作用而还原至起始状态。复合物Ⅱ是被氧化的带一个电子的中间产物，当H2O2过量，由于复合物Ⅲ或Ⅳ的形成，酶活性受YZ(以后补上)。30％的H2O2并不稳定。由于H2O2既为HRP的底物，也为其YZ剂，因而ELISA要想得到满意的测定结果，H2O2必须限定在一定的浓度范围内，终浓度通常为2～6 mmol/L。然而在实际研究工作中，一般很少注意这一点。大多数研究者所使用的H2O2的浓度常较理想反应所需的量大2～4倍。吸附于固相的HRP较游离的HRP更易受过量H2O2的YZ。如果30％H2O2贮存液浓度经测定证实确为30％，则稀释10 000—12 000倍常是较为理想的底物。H2O2的摩尔消光系数为10mm光径240nm波长下为43.6，因此，可通过这种方式来检测H2O2工作溶液的浓度。

固相ELISA中，当温度高于20℃时，HRP活性常较低，在底物溶液中加入非离子去垢剂聚山梨醇-20或TritonX-100可延迟HRP的失活，且可使反应温度加大，但非离子去垢剂的这种酶活性保护效应依*供体的不同而有差异。如以2,2’-联氮-双-[3-乙基*并噻唑啉]-6-磺酸(ABTS)为*供体，则只能保护20％的酶活性，而以邻联茴香胺(ODA)为*供体时，酶活性的保护提高至90％。

HRP之所以是迄今为止在ELISA中应用最为广泛的标记用酶，主要是因为其一方面易于提取，价格相对低廉;另一方面性质稳定，耐热及有机溶剂的作用，与抗原或抗体偶联后，活性很少受损失。

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