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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")唾液DNA样本保存管北京价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:唾液DNA样本保存管北京价格
编号:WE0402
品Pai:百奥莱博
规格:20套
产地:国产|进口
本产品包含唾液采样盒和唾液DNA样本保存管,可稳定保存唾液DNA样本。唾液DNA样本保存管中含有1ml的唾液DNA保存液,能迅速YZ唾液中的核酸酶,稳定唾液DNA。常温下,唾液DNA样本保存管中的DNA样本的储存和运输的时间长达两年。提取的DNA适用于下游多种基因检测,如PCR、芯片分析及二代测序等。
大部分基因的研究测试都始于DNA的采集,而传统的血液样品采集方法操作复杂,成本较高,新鲜血液需要在低温下保存,造成运输携带不方便,并且这种采血方法对被收集者造成伤害,带来痛苦,被绝大多数人所厌恶、甚至拒绝。而唾液中含有丰富的DNA,是样品采集的优质来源。唾液DNA样本采集与常规血液DNA样本采集相比,唾液样品采集是一种对人体无伤害、无痛苦的获取DNA的方法。该法不会对被收集者造成任何不适,容易被接受,因而能ZD限度的扩大基因研究的取样范围,特别适合分子流行病学大人群调查。常温下唾液DNA样本可以保存多年、绿色环保、携带方便。
除唾液DNA样本保存管北京价格外,我公司正在打折促销以下产品:
·TRIzon试剂(总RNA提取)
编号:WE0191
英文名称:TRIzon Reagent
规格:100ml
TRIzon是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便,颜色鲜明,便于分层。本试剂适用范围广泛,可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。样品在TRIzon中被充分裂解的同时能够ZD限度地保证RNA的完整性。在加入*仿离心后,溶液会分成三层:上层无色水相、中间层和下层红色有机相,RNA分布在上清层中。收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好,无蛋白和DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等。
自备试剂:*仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水(新开封或提取RNA专用)。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
3、本品中含有*酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛,应立即用大量的水冲洗并前往医院ZL。
4、样品用TRIzon 匀浆后,如不即刻加入*仿,置于-70℃下可放置一个月以上。
5、保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2~8℃可以保存一周,-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短,容易降解,建议提取后尽快进行后续实验,如反转录成cDNA,Northern Blot等。
6、若下游实验对DNA非常敏感,建议用不含RNase的DNase I(货号:WE0213A)对RNA进行处理。
操作步骤:
1.各种材料的处理
1a.植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzon中迅速研磨,每30-50 mg组织加入1ml TRIzon,混匀。
注意:样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。
1b.动物组织:取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎,每30-50 mg组织加入1ml的TRIzon,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzon 1ml混匀。
注意:样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。
1c.单层培养细胞:吸去培养液,可直接在培养板中加入适量TRIzon(每10cm2面积需要1ml TRIzon),用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后,将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中,300×g离心5 min,收集细胞沉淀,仔细吸除所有上清,加入TRIzon 1ml混匀。
注意:
1)收集细胞数量不要超过1×107。
2)TRNzol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定。如果TRIzon加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。
3)收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净,否则会导致裂解不完全,造成RNA的产量降低。
1d.细胞悬液:离心收集细胞。每5×106-1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml TRIzon。
注意:
1)加入TRIzon前不要洗涤细胞,以免RNA降解。
2)一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。
1e.血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积TRIzon(推荐0.25ml全血加入0.75mlTRIzon),充分振荡混匀。
1f.可选步骤:对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品,如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎,可以在匀浆处理后4℃,12000rpm(~~13400×g)离心10分钟以除去不溶物质,此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA,而RNA存在于上清中。
2、样品中加入TRIzon后反复吹打几次,使样本充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
3、向以上溶液中加入*仿,每使用1ml TRIzon加入0.2ml*仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置2-3分钟。
4、4℃下12000rpm离心15分钟,此时样品分成三层:红色有机相,中间层和上层无色水相,RNA 主要在水相中,把水相(约600μl)转移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇,颠倒混匀,室温放置10分钟。
6、4℃ 12000rpm 离心10分钟,弃上清。
7、加入75%乙醇(用无RNase的水配制)洗涤沉淀。每使用1ml TRIzon用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
8、4℃ 12000rpm离心3分钟,小心吸弃上清,注意不要吸弃RNA沉淀。
注意:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。
9、室温放置2-3分钟,晾干。加入30-100μl无RNase的水,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。
注意:沉淀不要过分干燥,以免难于溶解。
储存条件:2~8℃避光。
唾液DNA样本保存管北京价格关键词:百奥莱博,唾液DNA样本保存管,WE0402
·PBS(pH7.5,10×)
编号:WE0312
规格:500ml
·尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)
编号:WE0115
英文名称:Uracil-N-Glycosylase(UNG)
规格:200U|1000U
尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)也称为尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶),通过大肠杆菌表达纯化的重组酶,该蛋白分子量为25kD,可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,并且对RNA无活性,主要应用于防止PCR扩增产物的污染。该酶作用机理为:在PCR反应中以dUTP代替dTTP,扩增产物片段中的T全部被U取代,形成了含dU碱基的PCR扩增产物。UNG酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键,降解反应体系中含U的DNA,有效消除PCR产物的残留污染,大大降低扩增产物污染导致的假阳性,从而保证扩增的特异性和准确性。
活性定义:37℃,60分钟内催化1 nmol尿嘧啶,从含尿嘧啶的DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。
质量控制:SDS-PAGE检测纯度大于95%;经检测无核酸内、外切酶活性。
注意事项:
1、UNG长期储存(非频繁使用; 每月少于3次)请置于-70℃保存,每天或每周使用请于-20℃保存。尽量避免反复冻融,大包装建议分装使用。
2、UNG可以在PCR反应前先清除不慎污染的U-DNA分子,一个实验室必须在所有的PCR反应中使用dUTP作为dNTP之一,使所有扩增产物都成为U-DNA。如单使用于某个检测,T-DNA仍会积累,此抗污染系统也难以起到完全的作用。
3、UNG/dUTP系统是PCR试剂内部的一种防污染措施,为了防止PCR产物的污染,尤其是在临检实验室中反复放大同一片段时,必须严格规范实验室的划分和操作。
使用方法:
以下举例为Taq反应体系防止PCR产物污染的使用方法,实际应用可应根据具体实验进行改进和优化。
1、PCR反应体系
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
Taq PCR Buffer,10× | 5μl | 1× |
dATP,10 mM | 1μl | 200μM |
dGTP,10 mM | 1μl | 200μM |
dCTP,10 mM | 1μl | 200μM |
dTTP,10 mM | 0.5μl | 100μM |
dUTP,10 mM | 1μl | 200μM |
Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Template DNA | Xμl | |
Taq DNA Polymerase,5 U/μl | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
Uracil-N-Glycosylase,1 U/μl | 0.2μl | 0.2 U/50μl |
ddH2O | up to 50μl | |
2、反应条件 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
UNG消化 | 37℃-50℃ | 5-10 min | |
预变性 | 95℃ | 10 min | |
变性 | 94℃ | 30 s | 30-40个循环 |
退火 | 55-65℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 1 kb/min |
终延伸 | 72℃ | 5 min | |
注意:通常将Taq酶与UNG酶按一定的比例加入PCR反应体系中,先于37℃-50℃范围内消化5-10分钟,然后95℃ 10分钟灭活,(同时这一步也达到预变性和热启动的效果),随后进行PCR扩增。UNG酶的反应可以在37℃-50℃,5-10分钟的范围内变化,可以根据实验的需要进行调整。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
唾液DNA样本保存管北京价格关键词:百奥莱博,唾液DNA样本保存管,WE0402
·2×BAmp MasterMix(含染料)
编号:WE0106
英文名称:2×BAmp MasterMix(With Dye)
规格:5ml
BAmp MasterMix由BAmp DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。BAmp DNA Polymerase是一种兼具高扩增效率和高保真性的耐热聚合酶。其主要特点是可以GX扩增长片段DNA,尤其在扩增>10 kb的DNA片段方面,其优势更加明显,所扩增的片段最长可以达到40 kb。该酶具有高度的延伸和校对能力,保真度高于普通Taq酶。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷,可ZD限度地减少人为误差和污染。的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,重复性好。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测,无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。适用于构建基因图谱、序列测定及分子遗传学研究等。
产品组成: 组份 | 1ml | 5ml |
2×BAmp MasterMix(With Dye) | 1ml | 5×1ml |
ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意:2×BAmp MasterMix含有BAmp DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。
质量控制:
1、经检验无外源核酸酶活性;
2、PCR方法检测无宿主残余DNA;
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
2×BAmp MasterMix(With Dye) | 25μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
ddH2O | up to 50μl | |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 2 min | |
变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
退火 | 55-65℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 30 s |
终延伸 | 72℃ | 5 min | |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,BAmp DNA Polymerase的扩增效率为2.0 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
北京百莱博科技有限公司专业生产DNA纯化产品,欢迎来电咨询选购唾液DNA样本保存管北京价格。
温馨提示:不可用于临床ZL。