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北京百奥莱博专业生产供应北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价格厂家,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价格厂家
英文名:2×GC-rich PCR MasterMix
产地:国产|进口
品Pai:百奥莱博
规格:1ml
本品是由Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷,可ZD限度地减少人为误差和污染。经过优化的缓冲液配方使酶的作用发挥ZD功效,实现对复杂模板的高保真、GX率扩增,的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,重复性好。本品不含染料,PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于对保真性要求较高的PCR反应和结构复杂的模板如GC含量高,有二级结构等的扩增,对简单模板有效扩增的片段可达20kb,对复杂模板可达10kb。
产品组成:
组份 | 1ml |
2×GC-Rich PCR MasterMix | 1ml |
ddH2O | 1ml |
注意:2×GC-Rich PCR MasterMix含有Bes Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。
质量控制:
1、经检验无外源核酸酶活性;
2、PCR方法检测无宿主残余DNA;
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
2×GC-Rich PCR MasterMix | 25μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
ddH2O | up to 50μl | |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 2 min | |
变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
退火 | 55-65℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 30 s |
终延伸 | 72℃ | 2 min | |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Bes Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价格厂家极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·微量凝胶DNA回收试剂盒
编号:WE0169
英文名称:Gel DNA Extraction Micro Kit
规格:50次
本试剂盒专用于从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化微量DNA片段,溶胶速度快,并利用硅基质膜技术,以非常小的终洗脱体积(可少至10μl),从琼脂糖凝胶中,快速纯化50 bp-50 kb的DNA片段,纯化过程有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质,从而可获得高纯度、高浓度,完整性好的DNA,回收率高达90%。本试剂盒回收纯化的DNA可直接用于测序、连接和转化、酶切、标记、体外转录等分子生物学实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 |
Buffer PG | 25ml |
Buffer PS | 15ml |
Buffer PW(浓缩) | 10ml |
Buffer EB | 10ml |
离心吸附柱DE及收集管 | 50套 |
自备试剂:无水乙醇,异丙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2~8℃可保存更长时间。
2、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer PG如果出现结晶或者沉淀,可在37℃水浴中放置3-5分钟,即可恢复澄清。
4、电泳时使用新的电泳缓冲液,避免影响电泳和回收效果。
5、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
6、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少,洗脱体积越少,回收率越低。
7、将水浴锅预热至50℃。
8、Buffer PG中含有pH指示剂,当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色,此时DNA才能够有效的与膜结合,当pH值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色,需要进行调整。
操作步骤:
1、将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分),放入干净的离心管(自备)中,称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量)。
注意:若胶块的体积过大,可将胶块切成碎块。
2、向胶块中加入1倍体积Buffer PG(如凝胶重为100 mg,其体积可视为100μl,依此类推)。
3、50℃水浴温育,其间每隔2-3分钟温和地上下颠倒离心管,以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块,可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。
注意:
1)凝胶完全融解后胶溶液为黄色,可进行后续操作;若胶溶液为桔红色或紫色,可向胶溶液中加10-30μl 的3 M醋酸*(pH5.0),将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
2)胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、(可选步骤)当回收片段<300 bp时,应加入1/2胶体积的异丙醇,上下颠倒混匀(如凝胶重100 mg,则加入50μl的异丙醇)。
5、柱平衡:向已装入收集管中的吸附柱DE中加入200μl Buffer PS,13000rpm(~~~16200×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入450μl Buffer PW(使用前先检查是否已加入无水乙醇),13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
8、重复步骤7。
9、13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇的残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱放到一个新的1.5ml离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加10-50μlBuffer EB,室温放置2分钟。13000rpm离心1分钟收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意:
1)为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟。
2)回收大于10 kb的DNA片段时,Buffer EB应在50℃水浴中预热,可增加回收效率。
储存条件:室温(15~30℃)。
北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价格厂家关键词:WE0116,2×富含GC PCR MasterMix,2×GC-rich PCR MasterMix
·miRNA提取试剂盒
编号:WE0195
英文名称:miRNA Purification Kit
规格:50次
本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA, 还可以提取siRNA,snRNA等其他小于200nt的小分子RNA,同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合,独特的裂解液在有效YZRNases的同时,可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中,如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广,制备的RNA纯度高,可直接用于敏感的下游应用,如Northern Blot分析,Real-Time PCR,Microarray Analysis等。
试剂盒组成: 组份 | 50次 |
TRIzon Reagent | 60ml |
Buffer RWT(浓缩液) | 15ml |
Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
RNase-Free Water | 10ml |
吸附柱RM及收集管 | 50套 |
吸附柱RS及收集管 | 50套 |
RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:TRIzon Reagent 2~8℃避光保存,其它组分室温(15~30℃)。
自备试剂:*仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融,否则影响miRNA提取的量和质量。
3、DY次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
操作步骤:
方法一:miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
1、样品处理
①组织:将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent,震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
②单层培养细胞:吸去培养液,加入TRIzon Reagent,每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
③细胞悬液:离心得到细胞沉淀,弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
④血浆或血清:取200μl血浆或血清样本,加入5倍体积TRIzon Reagent,震荡混匀30秒。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次,使其充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
3、可选步骤:4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心5分钟,取上清,转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等,可选做此步骤)。
4、向上清中加入*仿,每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置5分钟。
5、4℃ 12000rpm离心15分钟,样品分为三层:红色有机相,中间层,无色水相,将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇, 混匀,将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱,请分多次转入。12000rpm离心30秒,离心后弃掉吸附柱RM,保留流出液。
7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇,混匀。
8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱,请分多次转入。12000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇),12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中,重复步骤13。
方法二:总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
1~5步骤同方法一。
6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇,混匀。
7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中,请分多次转入。12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中,向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,室温 12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中,重复步骤12。
储存条件:室温(15~30℃)。
北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价格厂家关键词:WE0116,2×富含GC PCR MasterMix,2×GC-rich PCR MasterMix
E0603 脱纤维裂解山羊血(无菌) 100ml/500ml
F010103 小鼠抗乙肝核心抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HbcAg
68988-92-1 Wright stain 瑞士色素
ARB14109 黄曲霉毒素B1(AFB1)酶联免疫定量检测
CYB163001 羊抗人IgG-FITC(抗全分子)
ARB10920 人抗髓鞘相关糖蛋白抗体(MAG Ab)elisa检测说明书 Human anti-myelin associated glycoprotein antibody,mag ab ELISA KIT
389-08-2 Nalidixic acid *啶酮酸
PY02-234 T1N1琼脂 250克
PL2001 BAC/PAC大型质粒提取试剂盒(溶液型,转染级)
ARB13675 兔血纤蛋白原(Fbg)含量测试 Rabbit fibrinogen,fbg ELISA KIT
CYB161043 牛IgG(冻干粉)
BTN120625 ATP溶液,100mM ATP Solution
F020109 山羊抗乙肝e抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBeAg
苊醌 Prohexadione calcium 82-86-0
黑色素(醇溶) 12-Aminolauric acid 8005-02-5
*基琼脂糖凝胶CL-4B Water-DEPC treated
ARB10687 人合胞病毒IgM(RSV)Elisa方法检测
ARB13737 兔基质金属蛋白酶1(MMP-1)检测服务 Rabbit matrix metalloproteinase 1,mmp-1 ELISA KIT
BL1230 2×HEPES(PH7.2-7.4,无菌)
我公司强烈推荐核酸扩增(PCR)系列产品,热情期待您的咨询选购北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价格厂家。
温馨提示:不可用于临床ZL。