SY0036型高保真DNA聚合酶现货促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括SY0036型高保真DNA聚合酶现货促销在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：SY0036型高保真DNA聚合酶现货促销
产地：国产|进口
编号：SY0036
英文名：Pfu DNA Polymerase
Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的，新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。

本产品中附带的5×Phanta SF反应缓冲液对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM)，可以使用产品中提供的DMSO或MgSO4对反应体系进行优化。另外，产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

产品特点：
• 保真度是Taq DNA Polymerase的52倍
• 扩增速度是常规聚合酶的4-150倍
• 广泛的模板适应性
• 优化的缓冲体系广泛适用于各种类型模板，便于快速得到理想的扩增结果
• 提供PCR Enhancer以帮助扩ZGGC含量的模板
• 提供即用型的预混液，ZD程度地减少实验步骤

产品组份：
5×SF Buffer(with 10mM MgSO4)：1.25 ml
25 mM MgSO4：1 ml
dNTP Mix(10 mM each)：100 μl
Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)：100 μl
5×PCR Enhancer：500 μl
DMSO：100 μl
10×Loading buffer：1.25 ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
储存条件：-20℃。

质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng人基因组DNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

引物设计注意事项
1）引物3’端ZH一个碱基为G或者C；
2）引物3’端ZH8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

关于SY0036型高保真DNA聚合酶现货促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·dNTP混合溶液(2.5 mM each)
编号：SY0046
英文名称：dNTP Mix (2.5 mM each)
规格：1ml
dNTP Mix为dATP、dCTP、dGTP和dTTP的预混溶液，各自的浓度为2.5mM，适合用于PCR扩增、real-time PCR、cDNA或普通DNA合成、DNA测序和标记等各种常规分子生物学实验。

dNTP Mix用超纯水配制，并用高纯度NaOH溶液调节pH值至7.0，纯度≥99%（HPLC）。经检测，不含DNase、RNase、phosphatase。可以直接用于PCR等各种常规分子生物学反应。

注意事项
1)可以室温溶解，溶解后宜存放于冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即置于-20℃保存。
2)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3)避免反复冻融，初次溶解后可以分装成小份使用。

储存条件：-20℃。


SY0036型高保真DNA聚合酶现货促销关键词：高保真DNA聚合酶,Pfu DNA Polymerase,SY0036


·20×Tris-Acetate-SDS电泳缓冲液
编号：SY0365
英文名称：20×Tris-Acetate-SDS Running Buffer
规格：500ml
Tris-Acetate-SDS Running Buffer是一种蛋白电泳缓冲液，主要用于在变性状态下利用Tris-acetate胶分离大分子量蛋白。

储存条件：室温

·腔肠素f
编号：SY0237
英文名称：Coelenterazine f
规格：1×500μg
本品为粉末形式供应的腔肠素f（Coelenterazine f），与天然腔肠素结构上的WY差别在于将其R-1位酚基上的羟基替换成*（F），是水母发光蛋白（aequorin）的底物。当腔肠素f和水母蛋白（Apoaequorin）一起被部分氧化得以活化，生成腔肠素的亚稳态复合物（aequorin）。与天然腔肠素-水母蛋白（Apoaequorin）复合物产生的光子总数相比，此复合物仅产生80%的光子能。但是其优点在于：仅需非常少的时间来生成aequorin复合物（通常来说此步反应很慢，比如60min内仅有40%的天然腔肠素完成反应）。另外，当其与Ca2+接触，即可快速且高产量的发光，产能强度是天然腔肠素的20倍。具有的细胞渗透性。当需要极高的Ca2+检测灵敏度来研究水母蛋白再生实验，推荐使用本底物。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当*离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内*离子水平。与常规的荧光*离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点，1）能检测较大范围的*浓度 – 从0.1 μM至 >100μM；2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光*离子指示剂；虽然信号比使用荧光*离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的*离子监测。



图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物（见附录1，腔肠素及其衍生物的特性）。

CAS：123437-16-1
分子式：C26H20FN3O2
分子量：425.46
外观：黄色至褐色粉末
溶解性：溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO
纯度：＞95%（TLC）
结构：



运输和保存方法：冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，保存在惰性气体下以避免接触空气。

注意事项
1）腔肠素f粉末使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成f氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


SY0036型高保真DNA聚合酶现货促销关键词：高保真DNA聚合酶,Pfu DNA Polymerase,SY0036


·Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
编号：SY0479
英文名称：Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
规格：20T
Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒是用红色荧光染料PE（Phycoerythrin）标记的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝*酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝*酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中提供的7-AAD可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。7-AAD是一种核酸染料，同PI有着相似的荧光特性，但其发射光谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的ZJ替代品，可与Annexin V联合使用。该染料不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可穿透晚期凋亡细胞或者坏死细胞并与其内的DNA结合。因此将Annexin V-PE与7-AAD联合使用时，7-AAD则被排除在活细胞（Annexin V-/7-AAD-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Annexin V-PE和7-AAD结合染色呈现双阳性（Annexin V+/7-AAD+）。

试剂盒组份：
重组人Annexin V/PE（rh Annexin V/PE）—————100µl
7-AAD Viability Staining Solution（20µg/ml）——200µl
4×Binding Buffer————————————————4ml

注意事项

1) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
3) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，7-AAD摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝*酸与Annexin V-PE的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
4) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并低速离心（200×g）洗去血小板，然后用Annexin V结合缓冲液清洗细胞，以避免残留的EDTA会螯合Ca2+。
5) 7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
6) Annexin V-PE和7-AAD是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购SY0036型高保真DNA聚合酶现货促销。