【实验原理】本试剂盒依据抗体固相阻断酶联免疫分析法原理,首先将待测样品,阴性、阳性对照品分别加入微孔板中,样品中如果存在目标抗体,其会与固相抗原结合,形成抗体-抗原复合物,经洗涤后加入HRP标记抗体,HRP标记抗体与未结合的固相抗原反应,形成HRP抗体-抗原复合物,经洗涤后加入显色剂并终止反应,测得吸光度OD
450值。
【操作步骤】1. 加待检测样本:在相应微孔中分别加入100微升的阴性、阳性对照品和待测标本,对照品的瓶塞应盖在原有对应的瓶口上,切勿混用。
2. 加酶标记抗体:在微孔中加入酶标记抗体100微升。
3. 孵育:用封口贴密封微孔板,使用微量振荡器或手工方式,震动30秒。将已密封的微孔板放置于水浴箱37◦C中孵育反应180分钟。
4. 洗涤:孵育完毕后,揭开封口贴弃尽微孔内液体,加入220~300微升稀释好的洗涤液,清洗微孔板3~5次。洗涤结束后用吸水纸拍干微孔壁内残余的液体,并将微孔板外部的液体与指纹擦拭干净。
5. 显色:将清洗后的微孔板平置于操作台上,每孔加入50微升的显色剂A,再加入50微升的显色剂B(或预先按照1∶1比例混匀后加入100微升/孔),混匀后,置于避光环境中,室温18~25◦C静置20分钟。
6. 终止:将微孔板从避光环境中取出,每孔加入50微升的终止液,轻微混匀。
7. 测量:将已终止反应的微孔板置于酶标仪读数槽内,使用检测波长450nm测量读取各孔的吸光度值(也可以使用双波长450nm和630nm测定),数据读取应在30分钟内完成。