特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括WE0402型唾液DNA样本保存管厂家现货在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:WE0402型唾液DNA样本保存管厂家现货
品Pai:百奥莱博
编号:WE0402
规格:20套
产地:国产|进口
本产品包含唾液采样盒和唾液DNA样本保存管,可稳定保存唾液DNA样本。唾液DNA样本保存管中含有1ml的唾液DNA保存液,能迅速YZ唾液中的核酸酶,稳定唾液DNA。常温下,唾液DNA样本保存管中的DNA样本的储存和运输的时间长达两年。提取的DNA适用于下游多种基因检测,如PCR、芯片分析及二代测序等。
大部分基因的研究测试都始于DNA的采集,而传统的血液样品采集方法操作复杂,成本较高,新鲜血液需要在低温下保存,造成运输携带不方便,并且这种采血方法对被收集者造成伤害,带来痛苦,被绝大多数人所厌恶、甚至拒绝。而唾液中含有丰富的DNA,是样品采集的优质来源。唾液DNA样本采集与常规血液DNA样本采集相比,唾液样品采集是一种对人体无伤害、无痛苦的获取DNA的方法。该法不会对被收集者造成任何不适,容易被接受,因而能ZD限度的扩大基因研究的取样范围,特别适合分子流行病学大人群调查。常温下唾液DNA样本可以保存多年、绿色环保、携带方便。
关于WE0402型唾液DNA样本保存管厂家现货的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·Super DNA Ladder
编号:WE0243
规格:100次(500μl)|500次(5×500μl)
Super DNA Ladder由10条DNA片段组成,分别为10000bp、5000bp、3000bp、2000bp、1,500 bp、1000bp、750 bp、500 bp、250 bp和100 bp。本产品含有1×Loading Buffer的DNA溶液,可取5μl直接电泳,使用十分方便;电泳时1000bp的DNA片段量约为150ng,显示亮带,其他条带的DNA量约为50ng。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、本产品可直接化冻混匀使用,无需加热。
2、请及时更换电泳缓冲液并使用新制琼脂糖凝胶,以免影响电泳结果。
3、DNA琼脂糖凝胶电泳时,凝胶的纯度对DNA条带的清晰度影响很大,因此尽量选用质量好的琼脂糖,推荐凝胶浓度为1%-3%,电压4-8 v/cm。
4、凝胶浓度与DNA片段的分离性能关系密切。凝胶浓度越大,对短片段DNA分离性能越好;反之,凝胶浓度越小,越有利于长片段DNA的分离。
使用方法:
取5μl 加入琼脂糖凝胶的加样孔中(如果加样孔较宽,大于6mm时,须适当增加上样量),进行电泳。
1%琼脂糖凝胶电泳图(5μl)
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期24个月。
·二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)
编号:WE0229
英文名称:NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina
规格:24次|96次
本试剂盒提供了DNA文库构建所需要的酶预混体系及反应缓冲液,包含除接头与PCR引物外的所有成分,用于illumina二代测序平台DNA文库构建。和一般建库方法相比,该试剂盒操作简单、方便,极大地缩短了文库构建时间。另外,试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集,无偏好的PCR扩增,扩大了序列的覆盖区域,可GX制备用于illumina二代测序平台的DNA文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,ZD程度上保证了文库构建的稳定性。
试剂盒组成:
组份 | 24次 | 96次 |
End Prep Enzyme Mix | 48μl | 192μl |
10x End Repair Reaction Buffer | 200μl | 800μl |
T4 DNA ligase | 48μl | 192μl |
T4 DNA ligase Buffer | 400μl | 2×800μl |
HiFidelity 2×PCRMasterMix | 600μl | 2×1.2ml |
试剂盒特点;
1、末端补平,磷酸化,加A一步完成。
2、不需纯化,直接加接头。
3、超保真扩增,ZD程度上降低了扩增偏好性。
4、支持多种样本,且所得文库能够用于Illumina GAIIx,HiSacnSQ、HiSeq 2500/2000/1000和MiSeq sequencing等测序平台的测序。
自备仪器、试剂和耗材:
1、磁力架:建议使用DynaMagTM-2(货号: 12321D)。
2、DNA纯化回收试剂盒:建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(货号: WE0205)。
3、样本接头引物试剂盒:建议使用百奥莱博二代测序多样本接头引物试剂盒 I/II(货号:WE0241/WE0240)。
4、无水乙醇,EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0),去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
5、反应管:建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管;枪头:建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、避免试剂的反复冻融,建议您首次使用试剂盒后将剩余试剂分装保存。
2、PCR产物因操作不当极易产生污染,导致实验结果不准确,建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离,并使用专门的移液器,定时对各实验区域进行清洁。
DNA建库流程示意图:
操作步骤:
样本要求: 5ng-1μg打断的双链DNA,溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中。DNA纯度要求:OD260/OD280=1.8~2.0。
DNA末端修复反应:
1、向200μl PCR管中加入以下试剂: 试剂 | 体积 |
10×End Repair Reaction Buffer | 6.5μl |
End Prep Enzyme Mix | 2μl |
fragmented DNA | X(5ng-1μg) |
RNase-free Water | Up to 65μl |
2、用枪头将上述溶液轻轻吹吸混匀,短暂离心,使所有组分收集到管底。
3、将上述PCR管置于PCR仪中,热盖打开, 反应程序如下:
15 min @ 12℃
15 min @ 37℃
20 min @ 72℃
Adaptor 连接:
建议使用百奥莱博adaptor进行连接,也可选择使用NEB、illumina公司的adaptor,具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤:
1、向上述已完成DNA末端修复的反应液中直接加入以下试剂: 试剂 | 体积 |
T4 DNA ligase buffer for illumina | 14μl |
T4 DNA ligase | 2μl |
Adaptor | 2.5μl |
此时管中溶液总体积为83.5μl。
注意:若起始样本量少于100ng,请将adaptor用去离子水稀释10倍至1.5μM后使用。
2、用枪头将上述试剂吹吸混匀,短暂离心,使溶液收集到管底。
3、20℃温浴15分钟。
注意:若此操作使用pcr仪,请将热盖关闭。
DNA片段的选择性回收:
建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。
注意:DNA片段选择性回收是可选步骤,若起始样本量低于50ng,不建议进行DNA片段选择性回收,直接进行DNA片段的纯化。另外构建不同大小的DNA文库时,DNA片段选择性回收的磁珠使用量不同,具体磁珠用量可参照附表1(若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠,需自行摸索ZJ磁珠用量)。
以下操作步骤中,可选择回收DNA片段长度峰值为320bp(插入片段长度200bp),反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure20秒,使其彻底混匀为均一溶液。
2、向连接反应液中加入16.5μl去离子水,使adaptor连接反应缓冲液体积至100μl。
注意:若使用NEB adaptor,只需要加入13.5μl去离子水。
3、将上述adaptor反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中。
4、加入70μl混合均匀的MCPure,涡旋震荡5秒钟后, 室温静置5分钟。
5、短暂离心,将离心管置于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠。
注意:不要弃除上清。
6、向上清中加入25μl混合均匀的MCPure,涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟。
7、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心吸取上清并弃除,期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意:不要弃除磁珠。
8、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清。
9、重复步骤8。
10、保持离心管固定于磁力架上,室温静置10分钟,使磁珠在空气中干燥。
11、将离心管从磁力架上取下,加入28μl 10 mM Tris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备),涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟。
12、短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将23μl洗脱液转移至一个新的PCR管中;
注意:一定不要转移磁珠,微量磁珠污染可影响后续PCR反应的正常进行。
另一种方案: DNA片段的纯化:
1、涡旋振荡MCPure20秒,使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure,涡旋震荡5秒钟后,室温静置5分钟。
4、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心吸取上清并弃除,期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意:不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清。
6、重复步骤5。
7、保持离心管固定于磁力架上,室温静置10分钟,使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下,加入28μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟。
9、短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将23μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。
附表1:不同片段选择回收时磁珠建议用量 DNA文库大小 | 插入片段 | 150bp | 200bp | 250bp | 300-400bp | 400-500bp | 500-700bp |
插入片段+adaptor | 270bp | 320bp | 400bp | 400-500bp | 500-600bp | 600-800bp |
磁珠用量 | DY次选择 | 85 | 70 | 55 | 50 | 45 | 35 |
第二次选择 | 25 | 25 | 20 | 20 | 20 | 15 |
PCR扩增:
1.在PCR管中加入以下试剂并混匀。 试剂 | 体积 |
连接adaptor后的DNA片段 | 23μl |
2×HiFid elity PCR Mix | 25μl |
Univesial primer | 1μl |
Index primer | 1μl |
总体积 | 50μl |
2、PCR反应条件: 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 30 s | |
变性 | 98℃ | 10 s | 6-16个循环 |
退火 | 65℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 30 s |
终延伸 | 72℃ | 5 min | |
注意:建议1μg样本起始量时PCR循环数为6个循环,50ng时10个循环,5ng时14-15个循环,PCR循环数也可根据实验需要进行优化。
PCR产物的纯化:
1、涡旋振荡MCPure20秒,使其彻底混匀为均一溶液。
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure,涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟。
4、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟)。小心吸取上清并弃除,期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意:不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清。
6、重复步骤5。
7、保持离心管固定于磁力架上,室温静置10分钟,使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下,加入30μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟。
9、短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将洗脱液转移至一个新的PCR管中约25μl,DNA文库在-20℃保存。
文库质量检测
文库浓度:
为了得到高质量的测序结果,需要对DNA文库进行精确定量,首先推荐使用Real-time PCR方法对DNA文库进行JD定量。此外,还可使用荧光染料法,如Qubit法或荧光染料picogreen法,此处请勿使用基于吸光度测量的定量方法。ZZ可使用以下近似公式换算DNA文库的摩尔浓度。 文库平均总长度 | 近似转换公式 | 成簇反应DNA文库浓度 |
200 bp | 1ng/μl=7.5 nM | 6-12 pM |
300 bp | 1ng/μl=5.0 nM | 6-12 pM |
400 bp | 1ng/μl=3.8 nM | 6-12 pM |
500 bp | 1ng/μl=3.0 nM | 6-12 pM |
文库长度分布
制备好的DNA文库可用琼脂糖凝胶电泳或Agilent 2100 Bioanalyzer检测DNA文库中的片段长度分布范围。
图1:Agilent 2100 Bioanalyzer文库分析结果
L:DNA Ladder;
S:使用200ng人基因组DNA构建文库,磁珠进行选择回收后结果。
文库结构
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT [Target Sequence] TGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACNNNNNNATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’
NNNNNN:index, 6bases
储存条件:-20℃
WE0402型唾液DNA样本保存管厂家现货关键词:百奥莱博,WE0402,唾液DNA样本保存管
·Y染色体人基因组DNA定量试剂盒
编号:WE0232
英文名称:Y Human Male DNA Quantification Kit
规格:1ml|5ml
本产品是一种检测人类男性Y染色体浓度的实时荧光定量PCR试剂盒,包括精心优化的PCR反应液、引物混合物、标准品,尤其适用于珍贵、微量DNA样本的定量检测。试剂盒采用了全新GX、快速的热启动扩增酶Goldstar Taq DNA Polymerase,有效避免常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增。本品实现对Y染色体的准确定量,后续可应用于各种领域如遗传制图、物种多态性研究、疾病基因定位、亲子鉴定和法医鉴定等研究分析。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因 此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-radiCyler iQ,iQ5,CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器:ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System, QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system, Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器:ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。
·Western Blot封闭液Ⅰ(BSA)
编号:WE0306
英文名称:BSA Blocking Buffer
规格:500ml
Western Blot 实验中,为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分(如抗体IgG等)发生非特异性吸附,导致实验结果不清晰,通常在进行一抗孵育前需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。本产品以BSA为基础,配合其他有效成份,可快速GX地封闭膜上多余的结合部位,减少非特异结合情况的产生,降低背景,适用于各种转印膜的封闭,操作方便快捷。另外,本产品特别添加了蛋白稳定剂,可保证每次实验封闭效果稳定可靠。
注意事项:
1、每次使用时,必须保证封闭液将印迹膜完全浸没,以免影响封闭效果。
2、本产品含有防腐剂,操作时请佩戴手套进行防护。
3、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体ZL。
操作步骤:
1、本产品无需稀释,开盖即用。
2、目的蛋白转移完毕后,将印迹膜放入容器中,加入适量BSA Blocking Buffer(以完全覆盖印迹膜为宜)。
3、室温孵育30分钟至2小时,必要时可2~8℃孵育过夜。
4、封闭结束后弃去BSA Blocking Buffer,进行Western Blot后续操作。
储存条件:室温
WE0402型唾液DNA样本保存管厂家现货关键词:百奥莱博,WE0402,唾液DNA样本保存管
·2kb DNA Marker
编号:WE0246
规格:100次(500μl)|500次(5×500μl)
2 kb DNA Marker由6条DNA片段组成,分别为2000bp、1000bp、750 bp、500 bp、250 bp和100 bp。本产品为已含有1×Loading Buffer的DNA溶液,可取5μl直接电泳,使用十分方便;电泳时750 bp的DNA片段量约为150ng,显示亮带,其他条带的DNA量约为50ng。
注意事项:
1、本产品可直接化冻混匀使用,无需加热。
2、请及时更换电泳缓冲液并使用新制琼脂糖凝胶,以免影响电泳结果。
3、DNA琼脂糖凝胶电泳时,凝胶的纯度对DNA条带的清晰度影响很大,因此尽量选用质量好的琼脂糖,推荐凝胶浓度为1%-2%,电压4-8 v/cm。
4、凝胶浓度与DNA片段的分离性能关系密切。凝胶浓度越大,对短片段DNA分离性能越好;反之,凝胶浓度越小,越有利于长片段DNA的分离。
使用方法:
取5μl 加入琼脂糖凝胶的加样孔中(如果加样孔较宽,大于6mm时,须适当增加上样量),进行电泳。
1%琼脂糖凝胶电泳图(5μl)
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期24个月。
我公司强烈推荐DNA纯化系列产品,热情期待您的咨询选购WE0402型唾液DNA样本保存管厂家现货。
温馨提示:不可用于临床ZL。