特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)怎么卖在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)怎么卖
英文名:NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
本试剂盒提供了构建DNA文库需要的酶预混体系及反应缓冲液,包含除接头以外的所有成分,制备的文库可用于Ion torrent PGM、Ion Proton二代测序平台的测序。和常规建库方法相比,该试剂盒将多个步骤进行了合并,省略了多个纯化步骤,因此显著降低了起始模板DNA的最少需求量,缩短了文库构建时间。另外,试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集,无偏好的PCR扩增,扩大了序列的覆盖区域,可GX的制备用于Ion torrent二代测序平台的DNA文库。
试剂盒组成:
组份 | 24次 | 96次 |
10×End Repair Buffer | 200μl | 800μl |
End Repair Enzyme Mix | 48μl | 192μl |
Ligation and Nick Repair Buffer | 400μl | 2×800μl |
T4 DNA Ligase | 48μl | 192μl |
Bst DNA Polymerase | 48μl | 192μl |
2×HiFidelity PCR Mix | 600μl | 2×1.2ml |
10×Primer Mix(5μM each) | 150μl | 600μl |
自备仪器、试剂和耗材:
1、磁力架:建议使用Life公司磁力架。
2、DNA纯化回收试剂盒:建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)。
3、样本接头引物试剂盒。
4、无水乙醇,EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0),去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
5、反应管:建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管;枪头:建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、避免试剂盒中Buffer的反复冻融,建议首次使用时将Buffer进行分装保存。酶在使用完应尽快放回-20℃保存,
2、PCR产物因操作不当极易产生污染,导致实验结果不准确,建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离,并使用专门的移液器,定期对各实验区域进行清洁。
DNA建库流程示意图:
起始材料:5ng-1μg打断的双链DNA,溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中,DNA纯度要求:OD260/OD 280=1.8-2.0。
DNA末端修复反应:
1、向200μl PCR管中加入以下成分,用枪头将上述溶液轻轻混匀,瞬时离心使所有组分收集到管底。 试剂 | 体积 |
10×End Repair Buffer | 6μl |
End Repair Enzyme Mix | 2μl |
fragmented DNA | X(10ng~1μg) |
RNase-Free Water | Up to 60μl |
2、将管子置入PCR仪中,热盖打开,反应程序如下:
20 min @ 25℃
10 min @ 70℃
Hold on 4℃
Adaptor 连接:
建议使用百奥莱博adaptor进行连接,也可选择使用Life、Kapa公司的adaptor,具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤:
1、向上述反应液中直接加入以下试剂, 用枪头将上述试剂混匀,短暂离心,使溶液收集到管底。 试剂 | 体积 |
Ligation and Nick Repair Buffer | 10μl |
T4 DNA Ligase | 2μl |
Bst DNA Polymerase | 2μl |
Adaptor A | 7μl |
Adaptor P1 | 7μl |
RNase-Free Water | 12μl |
Total volume | 40μl |
注意:建议Adaptor的加入量与DNA片段的摩尔比为10:1-20:1,具体Adaptor的使用浓度请参照下表。如果DNA量为10-100ng, adaptor建议使用浓度为1μM(小于260 bp)或 0.5μM(300-400 bp)。 插入DNA 量/反应 | 不同大小DNA 建议Adaptor 使用浓度 |
130 bp | 260 bp | 320 bp | 410 bp |
1μg | 10μM | 10μM | 5μM | 5μM |
500ng | 5μM | 5μM | 2.5μM | 2.5μM |
100ng | 1μM | 1μM | 0.5μM | 0.5μM |
2、反应步骤:
15 min @ 25℃
5 min @ 65℃
Hold on 4℃
Adaptor连接DNA片段的选择性回收:
构建不同大小的DNA文库时,需进行DNA片段的选择性回收。若起始样本量低于50ng,不建议进行DNA片段选择性回收。可参考另一种方案,直接进行DNA片段的纯化。建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠,需自行摸索ZJ磁珠用量。以下操作步骤采用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒,可选择回收DNA片段长度范围为310-370bp(读长为200bp),反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure 20秒,使其彻底混匀为均一溶液;
2、将100μl adaptor连接反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中;
3、加入60μl混合均匀的MCPure,涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟;
4、短暂离心,将离心管置于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠;
注意:不要弃除上清。
5、向上清中加入20μl混合均匀的MCPure,涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟;
6、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心移取上清并弃除,期间避免接触结合目标DNA的磁珠;
注意:不要弃除磁珠。
7、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清;
8、重复步骤7;为彻底移除残留液体,可将离心管短暂离心后,再次移除残留液体。
9、保持离心管固定于磁力架上,室温静置5分钟,使磁珠在空气中干燥;
10、将离心管从磁力架上取下,加入25μl 10 mMTris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备),涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟;
11、短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中;
另一种方案:Adaptor连接DNA片段的全部回收:
1、涡旋振荡MCPure20秒,使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure,涡旋震荡5秒钟后,室温静置5分钟。
4、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心吸取上清并弃除,期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意:不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清。
6、重复步骤5。为彻底移除残留液体,可将离心管短暂离心后,再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上,室温静置5分钟,使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下,加入25μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟。
9、短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。
PCR富集:
1、在PCR管中加入以下试剂并混匀: 试剂 | 体积 |
连接adaptor后的DNA片段 | 20μl |
2×HiFidelity PCR Mix | 25μl |
10×Primer Mix(5μM each) | 5μl |
总体积 | 50μl |
2、PCR反应条件: 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 30s | |
变性 | 98℃ | 10s | 4~12个循环 |
退火 | 65℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 30 s |
终延伸 | 72℃ | 5min | |
注:样本量为1ug时,4-6个cycles,样本量100ng时6-8个cycles,样本量为10ng时10-12个cycles。PCR循环数可根据实验进行优化。
PCR产物的纯化:
1、涡旋振荡MCPure20秒,使其彻底混匀为均一溶液;
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中;
3、加入1倍样品体积的MCPure,涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟;
4、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟)。小心移取上清并弃除,期间避免接触结合目标DNA的磁珠;
注意:不要弃除磁珠
5、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清。
6、重复步骤5;为彻底移除残留液体,可将离心管短暂离心后,再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上,室温静置5分钟,使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下,加入25μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟,短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中,DNA文库在-20℃保存。
储存条件:-20℃
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BL1368 DEPC处理水
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F030504 FITC标记小鼠抗HIS抗体 Monoclonal Mouse Anti-His*FITC
PY02-079 明胶培养基基础 250克
BL1329 通用引物 Random
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F030111 HRP标记羊抗乙肝核心抗原抗体 HRP*Polyclonal Goat Anti-HBcAg
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NF-229 羊抗牛IgG血清
ARB13422 鸡β内酰胺酶(β-lActAmAse)含量测试 Chicken β-lactamase ELISA KIT
ARB11548 人凋亡相关因子配体(FASL)血清中含量检测 Human factor-related apoptosis ligand,fasl ELISA KIT
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BL0945 生物素化兔抗山羊IgG抗体
制霉菌素 Azelaic acid 1400-61-9
二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)怎么卖关键词:二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台),WE0228,NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
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HC0327 芬兰Thermo
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ARB12705 大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)酶免分析 Rat glycogen phosphorylase mm,gp-mm ELISA KIT
SJ0696 超低分子量蛋白Marker Ⅰ (3.3-20.1kD)
ARB13870 猪白介素17(IL-17)ELISA检测服务 Porcine interleukin 17,IL-17 ELISA KIT
ARB10464 人生长激素释放肽(GHRP-Ghrelin)elisa检测说明书 Human growth hormone releasing Peptide-ghrelin,ghrp-ghrelin ELISA KIT
ARB11036 人纽蛋白(VCL)检测服务 Human vinculin,vcl ELISA KIT
BTNygtz22 荧光探针和示踪剂 Fluorescent Probe and Tracer
ARB13285 小鼠横纹肌辅肌动蛋白α(sm ActInIn-α)酶标法分析 Mouse skeletal muscle actinin-α,sm actinin-α ELISA KIT
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F030421 胶体金标记兔抗山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG*GOLD
*铂酸铵 Calcium hypophosphite 16919-58-7
ARB13071 小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)酶联免疫定量检测 Mouse tumor necrosis factor β,tnf-β ELISA KIT
PY01-110 6-苄*基嘌呤 1克
ARB10309 人巨噬细胞移动YZ因子(MIF)elisa检测说明书 Human macrophage migRation inhibitory factor,mif ELISA KIT
ARB13535 兔儿茶酚胺(CA)检测服务 Rabbit catecholamine,ca ELISA KIT
A5106-25 绵羊血清Sheep Serum
ARB11365 人前白蛋白(PA)酶标法分析 Human prealbumin,pa ELISA KIT
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·磁珠法DNA纯化回收试剂
编号:WE0205
英文名称:MagBeads DNA Purification Kit
规格:5ml|50ml
本试剂提供了一种简单、快速、GX的核酸纯化方法。该产品可用于二代测序建库时DNA的选择性或非选择性回收,以及PCR产物的纯化回收。MCPure与样品按一定比例混合后,磁珠选择性将核酸吸附。经两步漂洗后,洗脱得到的DNA纯度高,A260/A280的比值在 1.7-1.9之间, A260/A230的比值通常在2.0以上。经该试剂盒纯化得到的DNA适用于PCR,Real-Time PCR, 测序,southern blotting等实验。
试剂盒组成: 组份 | 96次 |
Buffer KCL | 96ml |
Buffer KCW1(浓缩液) | 72ml |
Buffer KCW2(浓缩液) | 60ml |
Buffer EB | 30ml |
蛋白酶K | 2×25mg |
蛋白酶K 储存液 | 2×1.25ml |
Magbeads PN | 4ml |
自备仪器及试剂:磁力架|80%乙醇|洗脱液:Buffer EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0);去离子水(pH在7.0-8.0之间)。
产率举例: 片段长度 | 典型产率 |
5000 bp | 高至90% |
1000 bp | 高至90% |
500 bp | 高至80% |
200 bp | 高至70% |
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、冰冻、离心、超声会对MCPure中的磁珠造成不可逆的损害。
2、MCPure中磁珠长期放置后会聚集成团,从而使磁珠表面积减小,降低样品回收得率,使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠。
3、使用前,建议将MCPure涡旋震荡混匀后分装到1.5ml的离心管中,每管分装1mlMCPure。
4、本试剂不适用于纯化回收小于100 bp的DNA片段,如果要回收小于100 bp的DNA片段,建议将MCPure的用量增加到样品体积的4倍。
5、进行DNA的选择性回收时,MCPure对于DNA溶液中的离子浓度较为敏感。不同厂家的二代测序建库试剂得到的接头连接后的DNA溶液以及PCR扩增产物中离子浓度不同,所以用MCPure做DNA选择性回收时,试剂用量有所不同。
操作步骤:
1、涡旋振荡MCPure 20秒,使其彻底混匀为均一溶液。
2、向1.5ml的离心管中加入纯化的DNA溶液。
3、向上一步的离心管中加入2倍样品体积的MCPure,涡旋震荡5秒后室温静置5分钟。
4、将上一步的离心管放于磁力架上,直至磁珠完全吸附(约需5分钟)。
5、保持离心管固定于磁力架上,彻底弃去溶液,期间避免接触磁珠。
6、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇。
7、保持离心管固定于磁力架上,待悬起的磁珠完全吸附后彻底弃去乙醇。
8、重复步骤6-7两次。
9、保持离心管固定于磁力架上静置放置10分钟,使乙醇完全挥发干净。
10、将离心管从磁力架上取下,加入20-100μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中后,室温放置5分钟。
11、将离心管放于磁力架上直至磁珠完全吸附(约需5分钟)。
12、将洗脱液转移至一个新的1.5ml离心管中。此时,可弃去磁珠。
纯化回收得率的计算:
我们建议通过琼脂糖电泳纯化前后的样品进行回收得率的计算。我们不建议通过260 nm处的光吸收值来计算回收得率。因为溶液中单链、双链DNA和dNTP以及一些纯化前的某些杂质在260 nm处都有光吸收,这样在计算回收前样品中DNA浓度时会得到一个假的、虚高的DNA浓度。
储存条件:室温(15~30℃)
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温馨提示:不可用于临床ZL。