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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括BaHF高保真DNA聚合酶现货供应在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:BaHF高保真DNA聚合酶现货供应
编号:WE0113
英文名:BaHF High Fidelity DNA Polymerase
品Pai:百奥莱博
规格:500U|2500U
本产品是经过特殊处理的热启动高保真聚合酶。该聚合酶具有5"-3"DNA聚合酶活性,5"-3"核酸外切酶活性和3"-5"核酸外切酶活性,在普通PCR条件下,与BaldStar Taq DNA Polymerase相比,具有扩增效率高、错配率低的优良性能。化学修饰使该酶在常温下没有聚合酶活性,有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增,酶的激活须在95℃下孵育10分钟,该条件可以整合入已有的PCR热循环程序。优化的缓冲体系使酶的作用发挥ZD功效,实现对目的片段的高保真、高特异性、高扩增效率、高灵敏度扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物的3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。本产品应用于常规的PCR、RT-PCR和多重PCR,特别适用于对特异性、保真性和扩增效率均有较高要求的PCR。
产品组成:
组份 | 500U | 2500U |
BaHF DNA Polymerase, 5 U/μl | 100μl | 5×100μl |
5×BaldStar PCR Buffer | 1.9ml | 5×1.9ml |
注意:本产品的5×BaldStar PCR Buffer中含有8.5 mM*离子。
活性定义:
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
1、经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;
2、经检测无外源核酸酶活性;
3、PCR方法检测无宿主残余DNA;
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;
5、室温存放一个月,无明显活性改变。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
5×BaldStar PCR Buffer | 10μl | 1× |
dNTP Mix,10 mM each | 1μl | 200μM each |
Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
BaHF DNA Polymerase ,5 U/μ l | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
ddH2O | up to 50μl | |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 10 min | |
变性 | 94℃ | 30 s | 30-40个循环 |
退火 | 55-65℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 60 s |
终延伸 | 72℃ | 5 min | |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品中所包含的BaHF DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品须在预变性95℃,10 min条件下实现酶的活化。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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BaHF高保真DNA聚合酶现货供应关键词:BaHF高保真DNA聚合酶,BaHF High Fidelity DNA Polymerase,WE0113
·抗β-Tubulin单克隆抗体
编号:WE0355
英文名称:Anti β-Tubulin Mouse Monoclonal Antibody
规格:100μl
微管是细胞骨架的重要组成部分,存在于所有哺乳动物细胞。它由分子量约55kD的α微管蛋白(α-Tubulin)和β微管蛋白(β-Tubulin)组成,并以αβ异源二聚体的形式存在。其中β-Tubulin蛋白表达水平相对恒定,常被用于Western Blot检测时校正系统的内参照。
抗体类型:鼠单克隆抗体IgG
免疫原:人工合成人β-Tubulin C末端多肽
应用范围:
WB(1:500-5000)
IHC(1:50-500)
ELISA(需摸索ZJ稀释度)
应用种属:人,小鼠,果蝇,非洲蟾蜍,袋鼠,衣藻
·酵母蛋白抽提试剂盒
编号:WE0263
英文名称:Yeast Proein Extraction Kit
规格:25次|100次
本试剂盒用于从酵母细胞中快速,GX而温和地抽提可溶性蛋白。采用试剂处理,可以避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。使用方便,避免了重复性差的研磨法,超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏。本抽提试剂可用于提取啤酒酵母、裂殖酵母、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌及革兰氏阳性菌的蛋白抽提。与传统方法相比,处理得到的提取液中可溶蛋白产量大,活性高,提取快速;提取液可以直接用于Ni-NTA、GST等亲和纯化。酵母蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶YZ剂混合物,可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。
试剂盒组成:
组份 | 25次 | 100次 |
Yeast Protein Extraction Reagent | 25ml | 100ml |
Protease Inhibitor Cocktail | 250μl | 1ml |
保存条件:Protease Inhibitor Cocktail:-20℃,其它组分:室温
注意事项:
1、提取液中含有去污剂,不宜使用受去污剂干扰的蛋白定量方法。
2、为了获得实验ZJ效果,请根据实验调整ZJ使用量。
使用方法:
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Yeast Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、将酵母培养液3000×g,4℃,离心5分钟,收集菌体。
3、取适量Yeast Protein Extraction Reagent,抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail,即1×工作液。
4、每50 mg酵母加入500μl 1×工作液,涡旋振荡或上下吸打使酵母充分重悬。
5、将细胞悬液置于冰上,孵育20分钟(每间隔5分钟轻微摇晃一下)。
6、~13400×g离心10分钟。
7、转移上清至新管中,进行下一步的蛋白含量测定、纯化及分析。
储存条件:-20℃
BaHF高保真DNA聚合酶现货供应关键词:BaHF高保真DNA聚合酶,BaHF High Fidelity DNA Polymerase,WE0113
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温馨提示:不可用于临床ZL。