EZ-T™ Simple Fast Ligation Kit

本产品是GX、便利的PCR产物克隆专用试剂盒。EZ-T^TM Simple载体是基于pBlueScript II SK(+) 质粒，通过对其多克隆位点区序列进行改造，去除了多克隆位点，再经酶切处理后获得的具有突出的3’-末端T碱基的线性载体。EZ-T^TM Simple载体不含绝大多数常用的限制性内切酶位点以及重组表达常用的NdeI和NcoI等位点，因而更适合用于含酶切位点的PCR产物的插入。该载体可与Taq 或Tth 等DNA聚合酶催化的携带3· -端A碱基的PCR产物互补连接，以利于下一步克隆或测序。由Pfu、Pwo 或KOD等高保真DNA聚合酶催化反应的PCR产物，也可经Taq DNA聚合酶添加3· -端A碱基后，与EZ-T™ Simple Vector连接。DNA测序建议使用M13 Forward和M13 Reverse，T7promoter和T3 promoter 通用引物。
本试剂盒提供预混有T4 DNA连接酶和2x Ligation Buffer 25℃下5分钟完成连接反应。试剂盒还提供一800 bp PCR产物（Control Insert）作为连接反应的阳性对照。用本试剂盒克隆约1 kb大小PCR片段的蓝斑率（即自连率）通常低于5%，白斑插入阳性率可高达90%以上。受载体自身大小的限制，2.5 kb以上PCR产物的克隆阳性率低于30%。

用途
• PCR产物的测序
• 含酶切位点PCR产物的亚克隆
• 利用lac promoter进行基因表达

特点

• 阳性率高：高纯度酶切型线性T载体，连接效率更高，蓝斑率低于10%
• 方便快捷：预混连接反应体系，最快5分钟实现连接，无需纯化，直接转化
• EZ-T™ Simple载体无常用酶切位点，利于含酶切位点基因克隆
• 无NdeI或NcoI位点，便于重组表达基因的克隆
• 提供纯化的PCR片段作为阳性质控对照
• 蓝白筛选：高表达活性的β-半乳糖苷酶，显色更快更深
• 批次稳定：遵循标准化生产流程，经过严格的质量检测
产品组分

保存条件

-20℃恒温保存一年，避免反复冻融，单次用量少时应适量分装

质量控制
插入DNA对照与载体连接的摩尔比例为3:1时，蓝斑率低于5%，有90%以上的白色菌落含插入DNA对照片段。经测序确认多克隆酶切位点及T碱基存在。