聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒 分子生物学试剂

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒 分子生物学试剂的品Pai：百奥莱博，是优质的分子生物学试剂产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒等分子生物学试剂产品请联系我司咨询订购。

名称：聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒 分子生物学试剂
产地：国产|进口
编号：XH052
品Pai：百奥莱博
本试剂盒采用可以GX、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA*(代"片")段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛
选、连接和转化等实验。配以特制的研磨杵和过滤柱，使你的操作更方便。
操作步骤：(所有离心步骤均可使用台式离心机在室温下离心)
DY次使用前请先在15ml漂洗液中加入60ml无水乙醇。
1、将单一的目的DNA条带从聚丙烯酰胺凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入1.5ml离心管中，称取重量，用研磨杵将胶尽量挤压碎。加入2倍体积的溶胶液吹打混匀（每100mg胶加入200ul溶胶液），75℃水浴30分钟。
2、用1ml的去尖吸头吸取混合物至过滤柱中（将胶一起吸入，溶液过多时可分次加入）。13,000rpm离心1分钟。将收集管中的滤出液转入新离心管。
3、取六倍体积结合液加入原离心管（每100mg胶加入600ul），清洗管壁后加入过滤柱中(溶液过多时可分次加入)，颠倒过滤柱或轻轻吹打几次混匀，13,000rpm离心1分钟。将两次收集的滤出液混合。
4、将总滤出液混匀后加入吸附柱中（溶液过多时可分次加入），13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。
5、向吸附柱中加入600μl漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm离心30-60秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。
6、向吸附柱中加入600μl漂洗液，13,000rpm离心30-60秒，倒掉废液。
7、将离心吸附柱放回收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂
洗液。将吸附柱开盖置于室温3-5分钟，彻底晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。
8、将吸附柱放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量65–70℃预热的洗脱缓冲液（20-30μl），室温放置2分钟。13,000rpm离心2分钟收集DNA溶液。
注意：①为了增加回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，13,000rpm再次离心1分钟。
②洗脱缓冲液体积不应少于20μl，体积过小影响回收效率。
③洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5之间。
9、DNA回收产物直接下一步实验或者-20℃保存。
注意事项：
1、电泳时使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
3、本试剂盒对<50bpDNA*(代"片")段回收效率偏低（30%左右），如想回
收，应加大结合液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
4、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越
小，回收率越低。

关于聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒 分子生物学试剂的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·50×Denhardt溶液
编号：XH041
规格：100ml
试剂组成：聚蔗糖（Ficoll，400型），聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 和BSA（组分V）
配制方法（1L）： 聚蔗糖（Ficoll，400型） 10g
聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 10g
BSA（组分V） 10g
加水至总体积为800ml，溶于水中定容（1L）。过滤除杂，分装-20℃贮存。
此产品只适合于DNA方面的实验，并不适合于RNA实验。

·通用RT-PCR试剂盒(两步法M-MLV)
编号：XH050
规格：50T/100T
5×M-MLV Buffer、10×PCR Buffer、MgCl2(25mM)、RNase-free ddH2O在2-8℃保存一个月对实验无影响，Oligo(dT)16(10uM)、Random(N)6(10uM)、dNTPs(10mM)在2-8℃保存一周对实验无影响，为了你的实验方便和试剂的稳定性，请自行决定试剂存放温度。试剂解冻后请混匀离心后再使用。微量试剂打盖前请离心。
产品简介：
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
本产品配有两种引物，一种为Oligo(dT)，另一种为随机引物（Random），如果用Oligo(dT)无法得到想要的结果，可以用随机引物（Random）试一下。
操作步骤：
一、反转录反应
1、在冰浴的无RNase的离心管（或者PCR管）中加入如下反应成分：
1-5ug总RNA或50-500ng mRNA
2ul Oligo(dT)16或2ul Random(N)6或者2 pmole基因特异性引物
补RNase-free ddH2O至13.5ul
2、70℃保温5min后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：
4ul 5×M-MLV Buffer
1ul dNTPs
0.5ul Rnasin
1ul M-MLV
3、42℃温浴60min，如果是用随机引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。
4、95℃加热5min终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。
5、用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50ul，取2-5ul进行PCR反应。

二、PCR反应
1、按以下各组分配制50ul PCR反应体系：
10×PCR Buffer 5ul
MgCl2 4ul
dNTPs 1ul
上游引物（用户自备）
下游引物（用户自备）
RT反应产物 2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul
2、简短离心，上PCR仪扩增，琼脂糖观察结果。

注意事项：
1、用于cDNA合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤CJ处理。
2、试剂盒的各组分应避免反复冻融，有效期12个月。
3、RNA样品要避免反复多次冻融，应使RNA在冰浴中处于融化状态。


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