2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料)北京现货促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销售，产品线涵盖2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料)北京现货促销在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料)北京现货促销
编号：XH035
规格：1ml/10ml
产品简介：
本公司生产的PCR MasterMix中加入了高性能PCR增强剂和稳定剂，适用于常规的PCR反应。由于多种PCR增强剂和稳定剂的发现，稳定GX预配好的PCR混合液不仅简化了操作程序、减少了污染、大大降低劳动强度和取样误差，而且增加了PCR反应的特异性，降低了对PCR条件的要求，使实验结果更加精确。
该产品分为含染料和不含染料两种体系，含染料是指含有电泳指示剂（并不含核酸染料），PCR结束后可以直接电泳，但象EB之类的染料还是必须加的。
质量控制检测：
经检测无外源核酸酶活性，PCR方法检测无宿主DNA残留，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，所有产品在-20℃条件下可保存一年以上，4℃放置三个月或室温放置一周，依旧有很好的活性。

更多有关2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料)北京现货促销的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·SABC双标试剂盒(免疫组化试剂盒)
编号：XH105
规格：100T
试剂盒组成:
1， 封闭液：10ml，5%BSA
2， 生物素化二抗：浓缩液100ul。
3， SABC-FITC:浓缩液100ul。
4， SABC-POD:浓缩液100ul。
5， 稀释液：30ml。
6， 显色液:20×DAB显色液A,20×DAB显色液B
7， 抗荧光衰减封片剂

试剂盒简介：
本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG/山羊的免疫组化实验. DAB及FITC显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂：
1．粘片剂多聚赖氨酸。
2． 0.01 M PBS（pH7.2-7.4）
3． 0.01M柠檬酸钠缓冲液
4、抗荧光衰减封片剂
实验步骤:
以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶（如果FITC，刚可省掉此步）。蒸馏水洗3次。
2．热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。
3．滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
4．用稀释液将一抗（如兔抗IL-10）按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
5．根据使用量,用稀释液将生物素化二抗浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul生物素化羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗兔IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。
如果想用荧光观察，请接下面步骤，如果想用DAB显色，请跳过6-7。
6．根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分钟(避光)。PBS（pH7.2-7.4）洗5分钟×4次。
7．滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
如果想用DAB显色，请接8。
8．根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗5分钟×4次。
9．DAB显色:根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mlPBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B 。混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10．苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞片，常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2（如果FITC，刚可省掉此步）处理15分钟；PBS漂洗两次，下接上面第4步。

对于冰冻切片，固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。

因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后封片观察。


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ARB11660 人蛋白激酶C(PKC)Elisa分析 Human protein kinase c,pkc ELISA KIT
BTN130530 His标签蛋白专用蛋白酶YZ剂 Protease Inhibitor for His-tagged Protein
BL0972 小鼠外周血淋巴细胞分离液
N-硝基-L-精氨酸 cis-Aconitic acid 2149-70-4
HC0111 透析袋MD44(8000-14000)
F030633 FITC标记山羊抗人IgG(H+L)抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG*FITC
F030411 胶体金标记山羊抗小鼠IgA抗体 Goat Anti-Mouse IgA*GOLD
ARB12292 大鼠抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)elisa检测 Rat anti-cardiolipin antibody igg,aca-igG ELISA KIT
ARB11024 人尿激酶(UK)Elisa定量检测 Human urokinase,uk ELISA KIT
PC4401 THERMOscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit(DY链耐热反转录试剂盒)
ARB12064 大鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)尿液中含量检测 Rat macrophage inflammatory protein 3α,mip-3α ELISA KIT
PY01-157  氯化钠(无水)  1公斤  
ARB12935 小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)定量分析 Mouse peroxisome prolifeRators activator receptors alpha,ppar-α ELISA KIT
溶菌酶(蛋清) AEC 12650-88-3
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·动物线粒体DNA提取试剂盒
编号：XH001
规格：50T/100T
储存条件：2～8℃，有效期一年。使用前，在DNA酶I中加入600ul（50T）或者1100ul（100T）的DNA酶反应液，分装后-20度保存。线粒体裂解液使用前常温保存，如有沉淀可37度水浴溶解，不影响使用。
三，说明
线粒体DNA提取的关键是尽可能的去掉核DNA。本试剂盒利用差速离心到比较纯净的线粒体，再利用DNA酶消化裂解缓冲系统等多步骤去掉核DNA，ZH得到纯净的线粒体DNA。可用于PCR等对纯度要求较高的实验。
本试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞线粒体DNA的提取制备。不适合植物及其他标本的提取。
四，操作步骤
准备工作：在DNA酶I中加入600ul（50T）或者1100ul（100T）的DNA酶反应液，适当分装后-20度保存。线粒体裂解液保存于常温，如有沉淀37℃水浴溶解，离心机温度下降到4℃（2-8℃），如无低温离心机，也可以常温离心，并将离心时间为10min的改为5min，但ZH所得DNA品质及产量可能会有一定影响。
1. 样本处理
a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨组织20次；
b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次；
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000× g 离心5 min；
3. 取上清，加入一新的离心管中，4℃，1000× g 再次离心5 min。
4．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底；
5. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000× g 离心5 min；
6．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；
7. 加入100ul DNA酶反应液重悬线粒体，吹打均匀后，再加入10ul DNA酶I溶液（见准备工作），混匀，37度水浴10min。此步为消化线粒体表面吸付的核DNA。4℃， 12,000 × g 离心5 min。尽可能的弃上清，再加入200ul TE 重悬线粒体沉淀，离心，洗去残留的DNA酶。
8.得到的沉淀，用100ul TE 重悬线粒体沉淀。加入200ul线粒体裂解液，轻轻混匀（不可吹打），放置2min左右，不超过5min，再加入150ul蛋白沉淀液，迅速混匀。4℃， 12,000 × g 离心5 min。此步骤可进一步去除核DNA。
9．取上清，加入一新的离心管中（可选用等体积的酚氯*(代"仿")异戊醇25:24:1抽提一次，再用氯*(代"仿")抽提一次，或者直接用氯*(代"仿")抽提两次，一般来说，此步可省，并不影响后续的PCR），加入0.6倍体积的异丙醇（如无异丙醇，可加入2.5倍体积的乙醇沉淀DNA）及10ul 核酸核酸助沉剂，混匀，-20℃沉淀半小时左右（此步可省），4℃， 12,000 × g 离心10 min。
10. 弃上清，再加入1ml 70%乙醇，4℃， 12,000 × g 离心10 min。重复用70%乙醇洗一次。
11. 弃上清后再次离心1min 吸弃上清，开盖凉干约5-10分钟。
12．加入20-30ul TE缓冲液,轻弹管底，37度水浴5分钟，线粒体DNA溶解。
13. 进行DNA电泳检测及-20度保存，进行下步的实验。
四 注意事项：
1. 为保证获得完整及尽可能多的线粒体，匀浆条件要示：DY是全程低温操作。第二是快速。第三，如用条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2．线粒体DNA本身含量很低，如果电泳检测不到，可加大上样量，用更少量的TE溶解沉淀，或者直接进入PCR检测。
2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。

一般低温度心机都有离心力显示，如果没有，可以用以下公式简单的换算。
转速与离心力换算
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；
[rpm] ２即：转速的平方； R为半径，单位为厘米。

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