ALH211 高保真PCR MasterMix

高保真PCR MasterMix 核酸扩增(PCR)

英文名：2×KOD PCR MasterMix

品Pai：百奥莱博

编号：ALH211

规格：1ml

产地：国产|进口

本品用于PCR，尤其用于PCR产物的克隆，DNA片段的平滑化。是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的3’→ 5’外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高，保真性是Taq的约50 倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase 的5倍，Taq DNA Polymerase 的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。本产品包含KOD DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可Z大限度的减少人为误差。本产品使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量2×KOD PCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。



单位定义：75℃活性测定条件下，在30min内摄入10nmol的dNTPs 使成为酸性不溶物时所需要酶的活性定义为1U。



储存条件：-20℃。



我公司的高保真PCR MasterMix 核酸扩增(PCR)，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销售下列产品：



·酵母基因组DNA快速提取试剂盒(柱式吸附)

编号：ALH152

英文名称：Yeast genomic DNA rapid extraction kit

规格：50次

本试剂盒采用DNA吸附柱和独特的溶液系统，适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。纯化DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， YZ物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。



试剂盒组份：

缓冲液YB————————————20ml

结合液CB————————————11ml

漂洗液WB————————————15ml

YZ物去除液IR—————————25ml

洗脱缓冲液EB——————————15ml

Lyticase(10U/μl)———————2500U

蛋白酶K冻干粉(20mg/ml)—————20mg

吸附柱AC————————————50个

收集管(2ml)——————————50个



产品特点：

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

3.快速，简捷，单个样品裂解后操作一般可在30分钟内完成。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。



注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2. 需要自备乙醇、异丙醇、β-巯基乙醇。

3. 开始实验前将需要的水浴先预热到37℃和70℃备用。

4. 结合液CB 和YZ物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5. 用户需要自备Sorbitol buffer( 1M 山梨醇， 0.1M Na2EDTA，14 mMβ-巯基乙醇)。

配制方法：在600 ml 去离子水里面溶解182.2 克山梨醇，加入200 ml 0.5M Na2EDTA (pH 8.0) ，不需要调节PH 值，定容到1L，4℃保存。临用前加0.1%β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)。

6. 菌体浓度检测一般OD600 值为1 的时候,酿酒酵母细胞是1-2×10^7cells/ml，由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD 值变化也很大，以上仅供参考。

7. 洗脱液EB 不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水

洗脱，但应该确保批pH 大于7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在－20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。



储存条件：室温，有效期12个月。



本制品别名：柱式酵母DNA提取试剂盒





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·酵母DNA提取试剂盒

编号：ALH154

英文名称：Yeast DNA Extraction Kit

规格：50次|100次

本试剂盒用于快速的从酵母中提取基因组DNA。在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下， 酵母细胞被裂解释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。



试剂盒组份(100次)：

酵母裂解液——————30ml

蛋白沉淀液——————10ml

DNA溶解液 ——————5ml



产品特点：

1.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂。

2.快速，简捷，整个过程可在1个小时内完成。

3.结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。



操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

1. 吸取1.5ml 酵母培养物到一个1.5ml 离心管； 12,000rpm 离心2 分钟，尽可能弃上清，必要时候可以用枪吸去。

2. 高速涡旋振荡，打散重悬酵母细胞团。

3. 加入300μl 酵母裂解液，涡旋振荡混匀，或者用1 毫升的枪头反复吹打混匀。酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，必须充分分散重悬。

4. 将裂解物放置在70℃水浴15-30 分钟。如果产量低，可以适当提高水浴温度和延长水浴时间，中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。

5. 冰上至少5 分钟使回复到室温。

6. 在回复到室温的裂解物内加入100μl 蛋白沉淀液后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀20 秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。冰浴5 分钟。

7. 13,000rpm 离心5-10 分钟。这时应该可以见到管底蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

8. 小心缓慢吸取上清到一个新的1.5ml 离心管中，不要吸到沉淀。吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2 分钟后取上清。

9. 加入等体积的室温异丙醇（约400μl），颠倒30 次混匀或者直到出现絮状DNA 沉淀（或者白色浑浊沉淀）。

10. 12,000rpm 离心1 分钟，在管底可以见到白色的DNA 沉淀块，倒弃上清。

11. 加入1ml 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA 沉淀，12,000rpm 离心1 分钟， 倒去上清（注意不要把DNA 沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。注意不要干燥过头，否则DNA极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能YZ下游如酶切反应。

12. 加入40μl DNA 溶解液重新水化溶解DNA 沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60 分钟（不要超过一小时），也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA。期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。

13. 加入10-15μl RNase A（10mg/ml），或者1-2μl RNase A（100mg/ml）颠倒混匀，37℃温育30－60 分钟去除残留RNA。该步骤主要作用为去除残留的RNA，如果残留RNA多，可以适当延长时间。如果残留RNA不影响实验，可略去该步骤。如果残留的RNA酶可能影响实验，也可以用等体积酚/氯仿抽提去除，然后用标准的乙醇沉淀回收DNA。

14. DNA 可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。



储存条件：室温，有效期12个月。



本制品别名：酵母基因组DNA提取试剂盒





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·长片段DNA快速高保真PCR MasterMix(含红色示踪染料)

编号：ALH610

英文名称：Fast&HiFi Long DNA PCR MasterMix

规格：1ml|5ml

本产品包含高速高保真长片段DNA聚合酶、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。所含DNA聚合酶为多种采用先进基因工程改造而来的超保真酶添加延伸因子混合而成，极大的提高了扩增长度、扩增速度、保真性和产量。本品是长片段超保真快速扩增的产品。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。



产品特点：

1. 扩增速度快：延伸速度可以达到3～4kb/min，是pfu的6～8倍。

2. 扩增产量高：一般PCR产物量比传统pfu产量高50%-。

3. 优异保真性：保真度是taq的54倍以上。一般随机挑一个菌测序便是正确无突变落。

4. 扩增长度长：以复杂基因组DNA为模板适合扩增不超过10kb左右的产物，以简单基因组、质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增不超过15kb左右的产物。



注意事项

1. 本系统扩增速度快，质粒和简单基因组等简单模板可以采用10～15秒/kb，复杂模板如人类基因组可以采用20～25秒/kb。

2. 如果电泳发现主带上下拖尾模糊现象，或者泳道出现从上样孔拖下来的涂抹带现象，一般提示延伸时间过长，梯度缩短延伸时间（建议10～15秒/kb为梯度减少延伸时间）直到获得满意结果。

3. 对于GC含量很高的模板，预变性和变性温度可以提高到98℃。本聚合酶耐热性强，98℃对本聚合酶的活性无改变。

4. 如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%～8%，按照1%梯度增加摸索浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1～1.7 M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）。



储存条件：-20℃，有效期2年。



本制品别名：2×PCR MasterMix|长片段PCR MasterMix|高保真PCR MasterMix

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