微球菌核酸酶 分子生物学试剂

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英文名：Micrococcal Nuclease
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：5000U
编号：BTN120412
产品简介:
Micrococcal Nuclease(微球菌核酸酶)是一种内切核酸酶，作用于单链及双链核酸，生成3′磷酸末端。对单链核酸的作用较好，能较好地分解DNA或RNA的富含AT或AU区域。本酶不需要Mg2+，其催化作用需要Ca2+的存在。 本酶主要用作：
1. 细胞粗抽提液中核酸的水解。
2. 为制备核小体(Nucleosome)时消化分解染色质(Chromatin)。
纯度:
1. 50 U的本酶和1μg的λDNA在Mg 存在下，37℃反应10分钟，DNA的电泳谱带不发生变化。
2. SDS-PAGE: ＞95%。
使用及效果:
DNA的片段化
1. 在微量离心管中配制下列反应液。
DNA 100μg
10×Buffer 5 μl
Micrococcal Nuclease 2U
dH2O up to 50 μl
2. 37℃反应数分钟(通过预实验确定具体反应时间)。
3. 加入5 μl的 200 mM EGTA(或 EDTA)停止反应。
4. 加入5 μl(1/10量)的 3 M NaOAC(pH5.2)。
5. 加入125 μl( 2.5倍量)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
6. 离心回收沉淀，用70％的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
备注:
本酶的活性严格依赖于Ca2+的存在，用EDTA或EGTA可以终止反应。微球菌核酸酶来源于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ) ，是一种非特异性的核酸内切酶和核酸外切酶。该酶从重组 E. coli 菌株纯化得到，可消化双链、单链、环化以及线性的核酸。在 pH 7.0-10.0 的范围内，微球菌核酸酶均有活性，无论对于 DNA 底物还是 RNA 底物，其最适 pH 值均为 9.2。微球菌核酸酶偏向于切割富含腺苷酸、脱氧腺苷酸或胸腺苷酸的底物。酶切 DNA和RNA底物产生带有 3" 磷酸的单核苷酸和二核苷酸。
活性单位定义:
以热变性小牛胸腺DNA作底物，在37℃、pH8.0的条件下，30分钟生成1OD260的酸可溶性物质所需要的酶量定义为一个活性单位(U)。
Buffer成分:
储存Buffer:Tris-HCl(pH8.0)50mM，NaCl50mM，DTT1mM，Glycerol50%。
反应Buffer，10×：Tris-HCl(pH8.0)200mM，NaCl50mM，CaCl225mM。
运输及保存:
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

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微球菌核酸酶 分子生物学试剂关键词：微球菌核酸酶,BTN120412,Micrococcal Nuclease

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