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超低分子量蛋白电泳试剂盒哪里卖
产地:国产|进口
品Pai:百奥莱博
编号:RFT078
规格:10次
● 产品组成:组分 名称 规格 贮存 运输
组分1 2×多肽电泳浓缩胶缓冲液 15 ml 4℃ 常温
组分2 2×多肽电泳分离胶缓冲液 30 ml 4℃ 常温
组分3 2×PAA溶液 超低浓缩胶用 15 ml 4℃ 常温
组分4 2×PAA溶液 超低分离胶用 30 ml 4℃ 常温
组分5 10% APS(干粉) 5 ml 常温 常温
组分6 TEMED 0.5 ml 常温 常温
组分7 10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS) 500 ml(干粉) 常温 常温
组分8 2×Tricine 上样缓冲液(含还原剂) 1 ml -20℃ 常温
组分9 FastBlue蛋白染色液 500 ml 常温 常温
● 产品简介:
本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳(多肽电泳)全*("套")试剂,可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶(8×10cm)。具有以下特点:1 适用范围广:2×多肽电泳缓冲液和2×PAA溶液中不含有SDS,适用于多肽的变性和非变性电泳。
2 分辨率高:凝胶缓冲液独特配方,可以有效分离1-5kD多肽。
3 稳定性高:凝胶缓冲液pH为中性,存放时间长。
4 使用方便:配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可配制凝胶。
● 贮存和效期:按照标签温度贮存;开封后有效期一年。
● 使用说明:一. 10% APS配制:10% APS配制-5 ml:将APS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
二. 制胶:I 配制分离胶
1.按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
表一 (一块1 mm mini胶用量)*
分离胶 浓缩胶
18%T /5 ml 5%T /2 ml
2×多肽电泳浓缩胶缓冲液 / 1 ml
2×多肽电泳分离胶缓冲液 2.5 ml /
2×PAA溶液 超低浓缩胶用 / 1 ml
2×PAA溶液 超低分离胶用 2.5 ml /
10%APS 45-60 μl** 20-30 μl
TEMED 5 μl 2 μl
注: * 如非必须,不要使用厚度1.5mm的凝胶,尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。
表二 超低凝胶制备凝固时间表
环境温度 20℃
分离胶配制 浓缩胶配制
分离胶配制量 5 ml -
浓缩胶配制量 - 2 ml
10%APS 50 μl 20 μl
TEMED 5 μl 2 μl
凝固时间 5-10 分钟 20-30 分钟
2.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层,使凝胶表面保持平整。
3.静置5-10分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。
1.按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
2.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
3.静置20-30分钟待凝胶聚合
三. 电泳:10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制:将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)粉末(Cat No:CB010P)置于一干净的一升烧杯中,加入500ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500ml 10×TTS缓冲液。
表三 1×TTS缓冲液配制
1×TTS配制量 500 ml 1×TTS配制量 1000 ml
10×TTS 50 ml 100 ml
超纯水 450 ml 900 ml
注:伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TTS缓冲液。
将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液,轻柔拔出梳子,用1ml移液器将梳孔吹洗干净,将Marker或蛋白样品(已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No:TP050]处理)加入点样孔,稳压电泳(表四),至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。
表四 多肽电泳条件
恒电压 150V
起始电流 60-75mA/板胶
结束电流 15-25mA/板胶
电泳时间 2.5-3小时
四. 染色(使用组分9-FastBlue蛋白染色液):● 用前必读:1 使用前如发现瓶中有少许沉淀,请混匀后使用。
2以下“使用方法”是针对0.75mm和1.0 mm厚度,10×10cm凝胶染色程序。
● 使用方法:1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适),条带1-2分钟即可见。
2. 摇床上常温摇动10-15分钟。
3. 观察结果。
● 注意事项:1. 使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝胶,如果使用更大面积或更厚的凝胶,请加入更多的染色液并延长染色的时间。
2. 常规染色所需的漂洗,固定,脱色步骤都无必要。
3. 本染色液可以重复利用1-2次,敏感性会有轻微下降,请延长染色时间。
4. 本染色液有轻微腐蚀性,请带手套操作。使用后,请盖好瓶盖,常温密封保存。
更多有关超低分子量蛋白电泳试剂盒哪里卖的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销售以下产品:
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·1×Western湿转转膜液
编号:RFT080
英文名称:Western Transfer Buffer
规格:1L(粉末)
1×Western湿转转膜液可以用于Western时湿法电转膜。
本Western转膜液是一种安全无毒的转膜液,没有使用剧毒的甲醇,也没有使用其它的有毒试剂。
本Western转膜液配制便捷,无需调节pH值。
本Western转膜液可以回收,回收后可以再使用2-3次。
保存条件: 室温保存,两年有效。
使用说明:1. 取一袋可以配制1升Western转膜液的粉剂,倒入到一洁净的烧杯中,加入蒸馏水到约700毫升,溶解。
2. 再加入200毫升无水乙醇或210毫升95%乙醇,混匀。
3. 然后在量筒中用蒸馏水定容到1升。混匀后即可使用。没有用完的转膜液可室温保存,通常两周内使用没有任何问题。当转膜液颜色变为浅棕色或黄褐色时,应该丢弃。
·λ DNA/HindIII+EcoRI(564-21226bp)
编号:RFT027
英文名称:Western Transfer Buffer
规格:100次
● 产品简介:
本产品是由λ DNA经HindIII和EcoRI完全双酶切而成,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。产品浓度为0.1μg/μl,已含有1×loading buffer,可直接取2-5μl上样,使用方便。12条带的大小分别为564,831,947,1375,1584,1904,2027,3530,4268,4973,5148,21226bp。
● 储存条件:4℃ 贮存(长期贮存置于-20℃)。
● 使用方法和说明:1.65℃加热5分钟,立即冰浴3分钟,取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中就行电泳。
注:根据梳子的厚度和宽度进行上样。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl。窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl;宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子,可以适当调整上样量。
2.建议电泳条件:凝胶浓度为1.0%,凝胶长度8-10cm,电泳电压4-10v/cm,电泳时间45分钟。
3.通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注:如果使用Goldview等染料就行染色,由于灵敏度比EB低,请酌情增加Marker的上样量。
● 注意事项:1.λ DNA酶切Marker的末端容易由COS末端结合在一起,电泳前65℃预热5分钟能解开结合的COS末端,得到更清晰的电泳图像。如果不预热,21226bp和3530bp会结合形成24756bp的额外片段,同时电泳后3530bp亮度会明显弱于其他片段。
2.琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响,电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
3.请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳,以保证Marker良好的分离效果。
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温馨提示:不可用于临床ZL。