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DNA Marker(300-5000bp)北京厂家现货
产地:国产|进口
品Pai:百奥莱博
规格:100次
编号:RFT020
● 产品简介:
本产品是由7条带状双链DNA条带组成,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。产品中已含有1×loading buffer,可根据实验需要,直接取2-5μl电泳,使用方便,电泳图像清晰。7条带的大小分别为300,500,800,1500,2000,3000,5000bp。其中1500bp条带含量为100ng/5μl,显示加亮带,其余条带含量为50ng/5μl。
● 储存条件:4℃ 贮存6个月(-20℃贮存一年)。
● 使用方法:1.取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中就行电泳。
注:根据梳子的厚度和宽度进行上样。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl。窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl;宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子,可以适当调整上样量。
2.建议电泳条件:凝胶浓度为1.0%,凝胶长度5-7cm,电泳电压4-10v/cm,电泳时间25-30分钟。
3.通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注:如果使用Goldview等染料就行染色,由于灵敏度比EB低,请酌情增加Marker的上样量;如果使用SYBR类染料染色,由于灵敏度比EB高,请酌情降低Marker的上样量
● 注意事项:1.琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响,电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2.请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳,以保证Marker良好的分离效果。
3.该Marker适用于DNA*(代"片")段大小的确定和对DNA含量的精确定量。
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DNA Marker(300-5000bp)北京厂家现货关键词:DNA Marker,RFT020,300-5000bp
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DNA Marker(300-5000bp)北京厂家现货关键词:DNA Marker,RFT020,300-5000bp
·pfu DNA聚合酶
编号:RFT101
规格:100U|5×100U
高保真平末端DNA聚合酶
● 贮存
-20℃保存一年。
● 产品简介
pfu DNA Polymerase是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶,该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外,还具有很强的3’-5’外切酶活性,增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比,pfu聚合酶热稳定性更好,更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A,为平滑末端,要通过平滑末端克隆法进行克隆。
● 产品组成(RTH3102-02)
pfu DNA Polymerase(2.5U/μl) 40μl
10×pfu PCR buffer(含Mg2+) 1ml
● 活性定义
1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
● 酶贮存缓冲液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol
● 适用范围
高保真的DNA*(代"片")段的扩增、DNA*(代"片")段的平滑化。
● 使用说明:1. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:成分 20μl反应体系 50μl反应体系 终浓度
Template 0.04-0.2 μg 0.1-0.5 μg as you wish
Primer 1(10 μM) 0.4 μl 1 μl 0.2 μM
Primer 2(10μM) 0.4 μl 1 μl 0.2 μM
10×pfu PCR buffer(含Mg2+) 2 μl 5 μl 1×
dNTP Mixture(10 mM) 0.4 μl 1 μl 200 μM each
pfu (2.5 U/μl) 0.4 μl 1 μl 0.05U/μl
ddH2O up to 20 μl up to 50 μl -
注1:如果需要改变Mg2+浓度,根据下表调节
PCR反应体系中Mg2+终浓度 2 mM 2.5 mM 3 mM 4 mM
20μl反应体系中25 mM MgSO4加入量 0 μl 0.4 μl 0.8 μl 1.6 μl
50μl反应体系中25 mM MgSO4加入量 0 μl 1 μl 2 μl 4 μl
注2:配制反应液时,请ZH加入pfu,因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性,有可能降解引物。
2. 混匀后,离心快甩将反应液收集到管底。
3. PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。
4. PCR仪上执行以下程序:步骤 温度 时间 循环数
初始变性 94℃ 3-5 min 1
变性 94℃ 30 sec 25-40*
退火 50-60℃* 30 sec
延伸 72℃ 0.5kb/min*
ZH延伸 72℃ 5 min 1
*注: PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定ZJ的反应条件(温度、时间等)。
● 注意事项
1. pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性,所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低,应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间,一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb;同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物,所以应ZH把pfu 酶到反应体系中,并立即进行 PCR 反应。
2. pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好,对于 GC 含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,对 pfu 酶的活性无影响。
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温馨提示:不可用于临床ZL。