YT032 化学发光法生物素标记核酸检测试剂

YT032型化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒现货供应

产地：国产|进口

编号：YT032

品Pai：百奥莱博

规格：1000cm2

英文名：Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit

本试剂盒是一种通过Streptavidin-HRP及后续的ECL试剂来实现化学发光检测Biotin标记核酸的检测试剂盒。适用于Southern blot、Northern blot、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA等实验中，采用生物素标记的DNA或RNA探针时的检测。本试剂盒不适用于生物素标记蛋白的检测。



本试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate，HRP和Streptavidin共价交联的比例大于3，这样比采用Streptavidin和Biotin-HRP conjugate两种试剂进行检测要更方便，并且灵敏度更高。采用了非特异性结合比avidin更低的strepatavidin，使检测结果背景更低灵敏度更高。



本试剂盒没有提供生物素探针标记相关的试剂，生物素标记的DNA探针或EMSA探针的制备可以相应地使用百奥莱博的生物素标记DNA试剂盒（TdT加尾法）或EMSA探针生物素标记试剂盒(YT189)。本试剂盒可以用于检测至少10块10 x 10cm有生物素标记EMSA探针的膜，即共1000cm2。



试剂盒组份：

ECL A液	55ml
ECL B液	55ml
Streptavidin-HRP Conjugate	100μl
封闭液	380ml
洗涤液(5X)	250ml
检测平衡液	250ml

储存条件：-20℃。



使用说明：

1. 在使用Biotin标记探针的情况下，完成Southern、Northern杂交及后续洗涤后，或RPA的转膜和交联后，或EMSA的转膜和交联后，可以使用本试剂盒开始检测。下面的检测过程中溶液的用量是用于一片10x10cm膜的量。如果膜较大或较小，各溶液的用量可以按比例放大或缩小。

2. 37-50ºC水浴溶解封闭液和洗涤液。

注意：封闭液和洗涤液必须完全溶解后方可使用，封闭液和洗涤液可以在室温至50ºC之间使用，但必须确保这两种溶液中均无沉淀产生，在冬天需特别注意。

3. 取一合适的容器加入15ml封闭液，再放入交联过的含有样品的尼龙膜。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。

4. 取7.5µl Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封闭液中(1:2000稀释)，混匀备用。

5. 去除封闭液，加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。

6. 取25ml 洗涤液(5X)，加入100ml重蒸水或MilliQ级纯水，混匀配制成125ml洗涤液。

7. 将尼龙膜转移至另一装有15-20ml洗涤液的容器内，漂洗1分钟。

8. 去除洗涤液，加入15-20ml洗涤液，在侧摆摇床或水平摇床缓慢上洗涤5分钟。

9. 重复步骤8三次(共洗涤四次)，每次洗涤时间均约为5分钟。

10. 将尼龙膜转移至另一装有20-25ml检测平衡液的容器内，在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动5分钟。

11. 取5ml ECL A液和5ml ECL B液混匀，配制成ECL工作液。注意：ECL工作液必须现配现用。说明：从本步骤起操作方法和注意事项同Western实验的荧光检测。

12. 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。立即将膜的样品面向上，放置到处于水平桌面上的洁净容器内或保鲜膜上。

13. 在尼龙膜的表面小心加上步骤11配制好的共10ml ECL工作液，使工作液完全覆盖尼龙膜。室温放置2-3分钟。

14. 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。将尼龙膜放在两片保鲜膜或其它适当的透光薄膜中间，并固定于压片暗盒(也称片夹)内。

15. 用X光片压片1-5分钟。可以先压片1分钟，立即显影定影，然后根据结果再调整压片时间；也可以直接分别压片30秒、1、3、5分钟或更长时间，然后一起显影定影观察结果。



关于YT032型化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒现货供应的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：



·L-苯丙氨酸脱氢酶

编号：YT549

英文名称：L-Phenylalanine Dehydrogenase (Crude Enzyme)

规格：100ml|1L

本酶为大肠杆菌表达的L-苯丙氨酸脱氢酶，并经简单纯化获得的可以确保达到一定酶活力的粗酶液，用于催化L-苯丙氨酸(L-Phe)氧化脱氨基生成苯丙酮酸。



CAS：69403-12-9

外观：半透明黄色溶液

酶促反应：L-phenylalanine + H2O + NAD+ = phenylpyruvate + NH3 + NADH + H+

储存条件：-20℃，有效期1个月。



注意事项：

1. 由于本产品需新鲜制备，在您确认订购后约8个工作日才能发货。

2. 粗酶液的每次冻融均可能会引起部分失活，所以收到酶液后请根据需要进行分装，并置于-20℃或更低温度保存。

3. 随着保存时间的延长，酶活力会有一定程度的下降，收到产品后应尽快使用。

4. 本产品在生产和保存的过程中可能会有混浊或沉淀产生，融化后混匀即可，不影响正常使用。



·Western一抗二抗清除剂(强碱性)

编号：YT071

英文名称：Antibody Stripping buffer(Strongly alkaline)

规格：250ml

本品用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为参照，或检测其它蛋白进行比较。通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。



使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜，会导致蛋白信号的减弱。但是，本Western一抗二抗去除液，经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用膜3-5次。使用本试剂只需大约15-20分钟即可实现蛋白膜的重复使用，然后可以进行封闭等后续的Western操作。



百奥莱博的不同的Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合，同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。



抗体清除剂选型表：

产品编号	YT071	YT072	YT073	YT074
产品名称	Western一抗二抗清除剂(强碱性)	Western一抗二抗清除剂(弱碱性)	Western一抗二抗清除剂(中性)	Western一抗二抗清除剂(酸性)
产品包装	250ml	250ml	250ml	250ml
pH	强碱性	弱碱性	中性	酸性
对于膜上蛋白的保留效果	好	好	好	好
对于一抗二抗的去除效果	好	好	好	好
去除一抗二抗所需时间	15-20分钟	20-30分钟	20-30分钟	40-80分钟
适用膜的类型	PVDF和NC	PVDF和NC	仅PVDF	PVDF和NC
腐蚀性	强	弱	无	弱

用于普通的Western检测时蛋白膜上一抗二抗的去除可以任选一种去除液。如果是NC膜，即硝酸纤维素膜时，不宜选用YT071N。从时间角度考虑，强碱性、弱碱性和中性的去除液所需的时间都比较短，可以优先考虑。从价格因素考虑，强碱性的去除液性价比Z高。从安全性考虑，中性的去除液由于没有腐蚀性而表现出更高的安全性。弱碱性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正确操作，并进行适当防护，使用强碱性的一抗二抗去除液也是完全可行的。

  对于特定的抗原和抗体，很难说哪一种Western一抗二抗去除液的效果。在遇到一抗二抗去除效果欠佳时，可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间，同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。同时也可以考虑尝试其它的一抗二抗去除液，以摸索出的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。



注意事项：

1. 使用辣根过氧化物酶(HRP)，任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶，如果使用碱性磷酸酯酶，任何一次封闭都应当使用酪蛋白。

2. 为取得效果，推荐使用PVDF膜。但硝酸纤维素膜也可以使用本Western一抗二抗去除液。

3. 使用化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测，例如DAB，NBT/BCIP，不适用于本试剂。

4. 本Western一抗二抗去除液有轻微腐蚀性，使用时请注意防护。



储存条件：室温，有效期一年。





YT032型化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒现货供应关键词：Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detec,化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒,YT032





·EDTA抗原修复液(50X)

编号：YT081

英文名称：EDTA Antigen Retrieval Solution

规格：100ml

本品是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。



细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。



本抗原修复液采用了广泛使用的EDTA，可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。



通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果，但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时，可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看，无论冰冻切片还是细胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定的样品，进行抗原修复都会有效去除蛋白之间的交联，充分暴露抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。



本产品特别适合用于石蜡切片，也可以用于冰冻切片等其它样品。



一个包装的本产品可以配制成5000毫升抗原修复液(1X)。按照每个片子需要10毫升抗原修复液(1X)计算，一个包装的本产品可以用于500个样品。



注意事项：抗原修复过程可以使用百奥莱博的染色缸和染色架或邮寄夹进行操作。塑料染色缸、染色架和邮寄夹可以很好地耐受沸水浴，而玻璃染色缸需避免骤冷骤热导致的玻璃破碎。



储存条件：4℃，有效期一年。





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·一氧化氮荧光探针(DAF-FM DA)

编号：YT285

英文名称：Nitric Oxide Fluorescent Probe

规格：>100次

本品是新一代用于一氧化氮定量检测的荧光探针，比以前比较常用的一氧化氮荧光检测探针DAF-2 diacetate有多方面的改进。首先，DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比，后和一氧化氮反应形成的荧光产物受pH值的影响小，在pH值大于5.5时不受pH值的影响。其次，DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比，前者产生的荧光更加稳定，不容易淬灭，这样更加便于检测。另外，DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比，前者对一氧化氮的检测灵敏度更高，相同条件下检测灵敏度可以提高接近2倍，Z低检测浓度可以达到3nM。





DAF-FM DA可以穿过细胞膜(cell-permeable)，进入细胞后可以被细胞内的酯酶催化形成不能穿过细胞膜的DAF-FM。DAF-FM本身仅有很弱的荧光，但在和一氧化氮反应后可以产生强烈荧光，激发波长为495nm，发射波长为515nm。DAF-FM DA检测一氧化氮的机制可以参考上图。任何可以检测fluorescein的仪器，包括荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计或荧光酶标仪都可以用于该荧光探针的检测。下图为DAF-FM在不同浓度一氧化氮存在时的发射荧光扫描图谱。





本DAF-FM DA为溶解于DMSO的淡黄色溶液，浓度为5mM。本荧光探针适合于检测细胞内的一氧化氮水平，可以进行实时检测。如果收集细胞后再装载探针，通常至少可以检测100个样品。



分子量：496.4

分子式：C25H18F2N2O7

纯度：＞98%（HPLC）



注意事项：

1. BSA和酚红对本荧光探针的检测有干扰，需避免。

2. 一次使用时请分装成小包装后-20℃保存，以避免反复冻融。

3. 荧光探针应随用随配。配制好的探针工作液应立即使用，不能以后再用。

4. DAF-FM DA在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。



储存条件：-20℃避光，有效期一年。

我公司生产供应销售的探针标记及检测产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购YT032型化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒现货供应。