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北京百奥莱博专业生产供应SABC双标试剂盒(免疫组化试剂盒)折扣价,我公司销售全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
编号:XH105
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:100T
试剂盒组成:
1, 封闭液:10ml,5%BSA
2, 生物素化二抗:浓缩液100ul。
3, SABC-FITC:浓缩液100ul。
4, SABC-POD:浓缩液100ul。
5, 稀释液:30ml。
6, 显色液:20×DAB显色液A,20×DAB显色液B
7, 抗荧光衰减封片剂
试剂盒简介:
本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG/山羊的免疫组化实验. DAB及FITC显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂:
1.粘片剂多聚赖氨酸。
2. 0.01 M PBS(pH7.2-7.4)
3. 0.01M柠檬酸钠缓冲液
4、抗荧光衰减封片剂
实验步骤:
以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶(如果FITC,刚可省掉此步)。蒸馏水洗3次。
2.热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3.滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
4.用稀释液将一抗(如兔抗IL-10)按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
5.根据使用量,用稀释液将生物素化二抗浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul生物素化羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗兔IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。
如果想用荧光观察,请接下面步骤,如果想用DAB显色,请跳过6-7。
6.根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃,30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗5分钟×4次。
7.滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
如果想用DAB显色,请接8。
8.根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液,混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗5分钟×4次。
9.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50ul 20×DAB显色液A,加入50ul 20×DAB显色液B 。混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞片,常规固定后,PBS漂洗两次,再用0.5%Txiton X-100室温20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2(如果FITC,刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次,下接上面第4步。
对于冰冻切片,固定后,可用PBS漂洗两次,再接上面第二步。
注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。
因为免疫组化指标众多,标本不一,此步骤仅作参考。
注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后封片观察。
更多有关SABC双标试剂盒(免疫组化试剂盒)折扣价的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销售以下产品:
·6×RNA loading buffer
编号:XH021
规格:1ml
试剂组成:0.5M EDTA pH8.0,甘油,溴酚蓝
此产品是将6×DNA loading buffer经过DEPC处理高压后而成。
使用时,可以在PE手套上,取1ul 6×RNA loading buffer再加入5ul RNA混匀即可上样。
此RNA loading buffer只适合于常规的RNA琼脂糖,高电压(250V),快速电泳,在RNA来不及降解时就电泳结束了。如果要做RNA甲醛变性胶电泳的话,可选用4×甲醛变性胶上样缓冲液。
·RNA/DNA病毒基因组提取试剂盒
编号:XH008
规格:50T/100T
原理简介
本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组,也可用于DNA病毒基因组的提取。本试剂盒利用蛋白酶K破开病毒外壳,放出RNA/DNA,用玻璃奶吸附达到纯化目的。
使用本试剂盒提取的RNA/DNA可用于各种常规操作,包括RT-PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
注意事项
1.一般病毒含量过低,ZH提取的基因组RNA/DNA电泳无法检测到,但RT-PCR/PCR等其他实验还会有结果。
2.同一样本,如果想大量提取,可以增加样本量,并且每一步试剂加量,但使用次数会成倍减少。
3. 所有离心步骤用低温离心机在4℃条件下离心,如果实验室没有低温离心机,也可以使用常温离心机,但所提得的RNA可能会降解严重些。
操作步骤
准备工作:使用前请先开启一瓶新的无水乙醇,倒入漂洗液中,倒满至离瓶口约0.5-1ml,盖上瓶口,摇匀。
1、 取病毒上清液0.5ml,12000rpm离心5min,尽量取上清使用,弃去沉淀。
2、 向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混匀,65℃消化10-20min,期间可颠倒离心管混匀数次。
3、 向管中加入500ul结合液,充分混匀。
4.玻璃奶摇匀。加入25ul摇匀的玻璃奶,混匀,室温放置2分钟,10000转/分钟离心1分钟,去上清;沉淀加入800ul漂洗液,振荡混匀,10000转/分钟离心1分钟,去上清,再用600ul漂洗液洗一次。去上清,再次离心2分钟,用小吸头吸去上清。
7.室温放置10分钟,加入30-50ul洗脱缓冲液混匀溶解,静置5分钟。离心,取上清为所提RNA。
SABC双标试剂盒(免疫组化试剂盒)折扣价关键词:SABC双标试剂盒,XH105,免疫组化试剂盒
·PCR试剂盒(教学用)
编号:XH049
规格:50T/500T
常规PCR发展到如今已经是非常成熟,对于大多数的科研人员来说,买TAQ酶和dNTP就可以,而如果为省事,可以直接买PCR MasterMix。而本试剂盒从PCR的原理来让学生学会PCR。本试剂盒带有模板和引物,可以产生500bp的单一条带。
试剂盒组成:
试剂盒组成
50次
500次
储存条件
Taq Polymerase(5U/ul)
50ul
500ul
-20℃
10×PCR Buffer
1ml
5ml
-20℃
MgCl2(25mM)
1ml
5ml
-20℃
模板(1ng/ul)
100ul
1ml
-20℃
上游引物(10mM)
100ul
1ml
-20℃
下游引物(10mM)
100ul
1ml
-20℃
ddH2O(PCR用)
2ml
25ml
-20℃
6×DNA Lodding Buffer
1ml
1ml
-20℃
500bp对照(50ng/ul)
100ul
1ml
-20℃
说明书
1份
1份
RT
保存说明:10×PCR Buffer、MgCl2(25mM)、ddH2O(PCR用)在2-8℃保存一个月对实验无影响,500bp对照、模板和引物在2-8℃保存一周对实验无影响。微量试剂打盖前请离心。
自备试剂:琼脂糖,电泳缓冲液,核酸染料(如EB,goldveiw等)
操作步骤:
按照下面的量加入试剂:可一次配50ul,或者一次配更多的量,如500ul,混匀再分成50ul一管。一般Taq PolymeraseZH加入。
加入试剂
加入量总50ul
加入量500ul
ddH2O(PCR用)
37ul
370ul
10×PCR Buffer
5ul
50ul
MgCl2(25mM)
4ul
40ul
模板(1ng/ul)
2ul
20ul
上游引物(10mM)
2ul
20ul
下游引物(10mM)
2ul
20ul
Taq Polymerase(5U/ul)
1ul
10ul
总体积
50ul
500ul
混匀。
按照下面的条件设置反应
温度
时间
循环次数
94℃预变性
3min
1 cycles
94℃变性
30sec
30 cycles
54℃退火
30sec
72℃延伸
500-2000bp/1min
72℃终延伸
5min
1 cycles
反应完降温到25℃
反应完后,取5ul产物,加入1ul 6×DNA Lodding Buffer 混匀电泳检测。可同时在两测跑一个500bp的对照。(1.5%的胶可以得到理想的结果)
SABC双标试剂盒(免疫组化试剂盒)折扣价关键词:SABC双标试剂盒,XH105,免疫组化试剂盒
·Bradford蛋白浓度测定试剂盒
编号:XH067
规格:2500微孔
本试剂盒自订购之日起九个月内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做2500孔。当使用2ml比色皿时可做250孔,如果是1ml比色皿时可做500孔。
产品简介:
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的ZD吸收峰的位置(lmax),由465nm变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明:
一,微孔酶标仪法
1. 完全溶解蛋白标准品,取10ml,加240ulPBS稀释至250ml ,使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取1ml 5×G250染色液,加入4ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3. 将标准品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。
4. 将样品作适当稀释(多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3-5分钟。
6. 用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
二,分光光度计法
如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下:
1,取八支(或者更多)干净的10ml离心管,标记上号。
2,取100ulBSA,加PBS2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。
3,5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取10ml 5×G250染色液,加入40ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4,按下表加入试剂(以每孔5ml计,多余的用来润洗比色皿)
5,反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性,可每间隔2分钟加一管染色液,每间隔2分钟测一管OD值。
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温馨提示:不可用于临床ZL。