siRNA/shRNA质粒载体构建技术服务

siRNA/shRNA质粒载体构建技术服务 

RNAi (RNAinterference, RNA干扰)技术，即将与内源 mRNA 编码区同源的小片段（19 －23bp）外源双链 RNA（double s`tranded RNA ）导入细胞中，通过一系列细胞内反应引发细胞中相应 mRNA 的降解，从而导致特定基因表达沉默的一种技术。RNAi的作用提供了一种经济、快捷、GX的YZ特异基因表达的技术手段，有助于研究该基因在生物模型系统中的作用，是研究基因功能的重要工具，并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因ZL研究的一种手段。

基本原理示意图 

siRNA/shRNA构建技术服务

本公司提供siRNA 载体的构建服务，siRNA 载体可以在细胞内直接转录出shRNA ，其干扰效果等同于siRNA ，而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息，包括基因的 mRNA 序列，Genbank Accession No. 和所属物种，本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列，在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体。可以为您节省大量的时间与精力。此方法是多种siRNA制备方法中可以进行长期基因沉默研究的方法。

闪晶生物siRNA载体构建服务程序：

1. siRNA表达载体的选用： 

本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记，可以建立稳定表达系，同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因，可以无限扩增。

2. 设计siRNA靶序列 

A 、根据目的mRNA序列，设计3条RNA干扰靶序列，靶序列一般为19 － 21nt 长。

B 、对于每条选定的siRNA 靶序列，设计 siRNA 正义链和反义链，以 loop(9nt) 相连，称为 shRNA（short hairpin RNA）。

C、阴性对照的设立.

3. 合成模板：

合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链，退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点，同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点，可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。

4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后，1 ％琼脂糖凝胶电泳，回收线性载体。

5. 连接与转化：

把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶，插入片断与载体的摩尔比约为 3 ： 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌，在LB Amp培养基上涂板，37 ℃培养过夜。

6. PCR 鉴定 

7. 测序鉴定

8.柱抽提阳性克隆载体并定量。

收费标准 siRNA载体构建订单下载

	个数		价格(￥)		时间
	1-3个siRNA表达载体构建		1800.00/个		14个工作日
	4－10个siRNA表达载体构建		1500.00/个		20个工作日
	10个以上		协商		协商

闪晶生物同时提供腺病毒和慢病毒载体的构建服务,5000.00元/个.

腺病毒慢病毒构建包装扩增纯化服务