血清/石蜡包埋样本 miRNA 荧光定量 PCR（qPCR）检测服务

三、miRNA qPCR技术服务样品提供
   a. RNA样品：取10µg总RNA，并提供RNA质量检测图。要求浓度在500ng/µl以上，体积在20µl以上，OD260/OD280的比值在1.8至2.0之间，电泳检测28s的亮度约为18s的两倍。-80℃贮存，干冰运输。
   b. 组织样品：请将200mg以上的组织样本，并分装为两管。-80℃或者液氮贮存，干冰运输。
   c. 血液样品：请提供至少2mL血样，并在2小时内处理完毕后加入Trizol。
     全血：用EDTA等抗凝剂处理后的样本，按每200µl全血加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol，涡旋摇匀，放入干冰或者-80℃箱保存，干冰运输。
     血浆：用EDTA等抗凝剂处理后的样本，4℃ 4000rpm离心5分钟，上层为血浆样本，按每200µl血浆样本加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol，涡旋摇匀，放入干冰或者-80℃冰箱保存，干冰运输。
     血清：用非抗凝管收集血样，静置分离上层血清，按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol，涡旋摇匀，放入干冰或者-80℃冰箱保存，干冰运输。
  d. 细胞样品：
    贴壁细胞
   （1） 贴壁细胞培养或处理结束后，去除培养液；
   （2） 按每10 cm2 培养面积加1 mL Trizol试剂的比例加入Trizol试剂；摇匀，保证所有细胞接触到Trizol而被充分消化；
   （3） 用1 ml枪头反复吹打, 并将Trizol细胞悬液转移至RNAase-free 的EP管中；
   （4） 放入干冰或-80℃冰箱中保存，干冰运输。
   悬浮细胞
   （1） 悬浮细胞培养或处理结束后，离心去除培养液；
   （2） 保留的细胞用PBS 缓冲液快速洗一次，离心除去PBS 缓冲液；
   （3） 按照每5×106 个细胞加1 mL Trizol的比例加入Trizol试剂，涡旋振荡使细胞充分悬浮；
   （4） 放入干冰或-80℃冰箱中保存，干冰运输。

 

Fig.1. U6 snRNA (石蜡包埋组织)溶解曲线及扩增曲线

Fig.2.  不同miRNA  在Control  及Treat (石蜡包埋样品)中差异表达分析