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北京百奥莱博专业生产供应BL21(DE3)受体菌优惠价,我公司销售全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
编号:XH043
规格:1ml
产地:国产|进口
品Pai:百奥莱博
BL21(DE3)受体菌
基因型:F_ ompT hsdS B(rB_mB_)dcm gal (DE3)
细胞种类
GX表达宿主菌BL21(DE3)
BL21(DE3)用于GX表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
保存:所有受体菌均为甘油保存,-70℃可长期保存,-20℃可保存一年。
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·琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
编号:XH014
规格:100T/400T
原理简介
本试剂盒利用独特的缓冲液,可从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。
对于切下后不超过150mg的凝胶块,本试剂盒(以100T为例)可用100T。对于更小的凝胶块,本试剂盒使用次数更多。
注意事项
1、电泳时使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。
2、如下一步实验要求较高,则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
3、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
4、回收<200bp DNA片段时,应加大溶胶液的体积(如5倍体积或者更高)。
5、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越小,回收率越低。
6、如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤
1.将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取凝胶重量(可以用同一包装中的离心管去皮称量,各离心管间的误差可忽略)。
2.向胶块中加入3倍体积溶胶液(如果凝胶重为0.1g,其体积可视为100µl,则加入300µl溶胶液,如为小片段,可加入5倍体积或者更高体积),50-55℃水浴放置5-10分钟,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解。
3.玻璃奶混匀。取25ul混匀的玻璃奶加入上面溶解的溶胶液中。混匀。
4.室温放置2-3分钟。期间可翻转混匀1-2次。
5.10000转/分钟离心1分钟,去上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振荡混匀,10000转/分钟离心1分钟,去上清,70%乙醇重复洗一次,再用无水乙醇洗一次。去上清,再次离心2分钟,用小吸头吸去上清(70%乙醇洗两次,无水乙醇洗一次)。
6.室温放置10分钟,加入30-50ul TE缓冲液混匀溶解,50-55℃水浴5分钟。离心,取上清转移到一新的离心管中。此为所提质粒。
7.电泳或者其他方法检测,进入下游实验。
BL21(DE3)受体菌优惠价关键词:BL21,XH043,DE3
·去内毒素质粒DNA提取试剂盒
编号:XH012
规格:50T/200T
原理简介
本试剂盒在常规质粒提取试剂盒的基础上改进而来,增加内毒素清步骤,提取的质粒可用于一些要求更高的实验,如转染。
本试剂盒(以200T为例)可以用200小次或者10大次提取。
注意事项
1.溶液Ⅱ低温时可能出现析出和沉淀,可以37度水浴几分钟即可恢复澄清透明。用完请及时盖紧盖子。
2.溶液Ⅰ中加入RNase 后请放2-8度保存,如果长久不用(如一个月),可-20度冻存,或者按照比较分次加入。
3.可根据实验情况中量或者大量提取,加入的试剂等比放大。
4.内毒素清除剂在常温下出现面混浊现象,为正常,在2-8℃放置一段时间混浊会消失。
5.本试剂盒在去除内毒素的过程中会损失少量质粒,因而相对于常规提取,本试剂盒得率偏低。
操作步骤(以小量提取为例,中提或者大提可等比例加入)
在溶液Ⅰ中加入RNaseA,混匀,2-8度保存。
1.取过夜菌1-5毫升,5000g离心1分钟收集细菌沉淀,弃上清(可重复多次收集于一管中,收集量可考虑菌液浓度与质粒拷贝数),如为阳性细菌,可加入100mg/ml的溶菌酶悬浮菌液,37度处理30分钟,离心,收集沉淀。
2.在收集的菌液中,加入200ul溶液I,重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开,无可见细菌团块(可vortex 5-10秒或更长时间)。室温放置2-3分钟。
3.每管加入200ul溶液Ⅱ(如有沉淀,可37度水浴),轻轻颠倒离心管4-6次,使细菌完全裂解,溶液透明。放置2-3分钟,不过超过5分钟。但也不要混匀后立刻加入溶液Ⅲ。
4.放置2-3分钟后,每管加入200ul溶液III,随即颠倒离心管4-6次混匀,可见白色絮状物产生。
5.ZG速(13,000rpm左右)室温离心5分钟。
6.将上清转移到新的离心管中,如有沉淀,可再次离心。
7.加入上清1/5体积冰预冷的内毒素清除剂,振荡混匀,溶液变浑浊,冰浴2min至溶液变清亮。
8.37℃水浴2min,不时振荡,溶液又变浑浊。12000rpm室温离心2min,溶液应分为两相,上层水相含质粒DNA,下层油状相含内毒素。
9.将含质粒DNA的上层水相转移至新管,弃下层油状相,注意不要吸入油状相。重复抽提三次,即重复步骤7-9三次。
10.在得到的上清中加入等体积的结合液,再加入等体积的无水乙醇,混匀(上清:结合液:无水乙醇=1:1:1)
11.玻璃奶摇匀。取20ul混匀的玻璃奶加入上面的混合液中,混匀。室温放置5分钟,期间颠倒2次。
12.10000转/分钟离心1分钟,倒掉上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振荡混匀,10000转/分钟离心1分钟,去上清,70%乙醇重复洗一次,再用无水乙醇洗一次。去上清,再次离心2分钟,用小吸头吸去上清。
13.室温放置10分钟(如果为大提,请延长放置时间到30分钟,此步为去除残余酒精,以免影响下游实验),加入30-50ulTE缓冲液混匀溶解,55℃水浴5分钟。离心,取上清转移到一新的离心管中。此为所提质粒。
14.电泳或者其他方法检测,进入下游实验。
BL21(DE3)受体菌优惠价关键词:BL21,XH043,DE3
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温馨提示:不可用于临床ZL。