一步法大提质粒 DNAout5次使用说明书注意事项：
1.从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响一链的合成，也不影响PCR反应。
2．匀浆后加之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3．分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。
一步法大提质粒 DNAout5次使用说明书操作说明：
1.将待测种子用温水(30-35℃)浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子100粒，沿种胚ZX线纵切为两半，将每粒种子的一半分别置于两个培养皿中，备用。
3.（可选）可将其中一半种子置于沸水中煮沸5min，杀死细胞，作为阴性对照。
4.向含有种子的培养皿中加入TTC溶液，以浸没种子为度。
5.放入30-35℃的恒温箱内保温30min-1h。
6.倒出TTC染色液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种子着染况。
一步法大提质粒 DNAout5次使用说明书主要优级纯、分级纯和化学纯3种：
（1）优级纯（GR：Guaranteed reagent），又称一级品或保证试剂，99.8%，这种试剂纯度Z高，杂质含量Z低，适合于重要精密的分析工作和科学研究工作，使用绿色瓶签。
（2）分析纯（AR），又称二级试剂，纯度很高，99.7%，略次于优级纯，适合于重要分析及一般研究工作，使用红色瓶签。
（3）化学纯（CP），又称三级试剂，≥ 99.5%，纯度与分析纯相差较大，适用于工矿、学校一般分析工作。使用蓝色（深蓝色）标签。
（4）实验试剂（LR：Laboratory reagent），又称四级试剂。
0.2ml
Anti-ER- Alpha(phospho-Tyr537)/FITC 荧光素标记抗大、小鼠磷酸化雌激素受体α抗体IgG 0.2ml
Anti-Phospho-Progesterone Receptor (Ser190)/FITC 荧光素标记磷酸化孕激素受体抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho-ERK1(pThr202/pTyr204)/FITC 荧光素标记抗磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho-ERK1(pThr202/pThr204)+phospho ERK2(pThr183/pTyr185)/FITC 荧光素标记抗人、大、小鼠磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho-ERK1(Thr197/Thr202) /FITC 荧光素标记磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho-CaMK2a (pThr286)/FITC 荧光素标记抗磷酸化钙/钙调素依赖蛋白激酶2α抗体IgG 0.2ml
一步法大提质粒 DNAout5次使用说明书Anti-phospho-CaMK2a(pTyr231) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠等磷酸化钙/钙调素依赖蛋白激酶2α抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho-ATF2(pSer490/pSer498)/FITC 荧光素标记抗磷酸化活化复制因子2抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho APP(pThr668)/FITC 荧光素标记抗磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho-P53(pSer392)/FITC 荧光素标记抗磷酸化肿瘤YZ基因P53抗体IgG 0.2ml
Anti-phosphor-PAK1+PAK2+PAK3 (pSer141)/FITC 荧光素标记抗磷酸化p21激活激酶1/2/3抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho-PAK1/2/3(pThr423)/FITC 荧光素标记抗磷酸化p21激活激酶1/2/3抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho-PAK1(pSer144)/FITC 荧光素标记抗磷酸化p21激活激酶1抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho-PAK2(pSer141)/FITC 荧光素标记抗磷酸化p21激活激酶2抗体IgG 0.2ml一步法大提质粒 DNAout5次使用说明书(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5):异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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