BTN71101 一步法大提质粒DNA提取试剂盒

特别提示：包括一步法大提质粒DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：一步法大提质粒DNA提取试剂盒

英文名称：One-step plasmid DNA large-scale extraction kit

产品货号：BTN71101

产品规格：5次



本试剂盒是在我司一步法质粒DNA提取试剂盒2.0(BTN70903)基础上开发的、能够快速从100mL左右的E.coli培养液中取质粒DNA的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。



试剂盒特点：

1.快速，整个质粒DNA提取过程只需要不到30分钟，比传统的碱变性方法快捷。

2.超螺旋比例高，的非碱法一步式细菌裂解技术，避免了强碱对DNA的损害，得到的质粒DNA 切口更少。

3. DNA 纯度高，几乎没有基因组DNA和RNA污染，OD260/280一般在1.7-1.9 之间。

4. DNA可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。

5. zuì大吸附量为600μg DNA，具体产率取决于质粒拷贝数。

6. 过程简单，重复性和稳定性好。



试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100ml
大离心吸附柱	5套
通用预洗液	100ml
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(溶液A需要4℃保存)，有效期一年。



使用方法：

1. 用50mL离心管分数次收集10-100mL 新鲜的菌液，一般可以5000rpm离心10分钟，去除上清即得细菌沉淀。

2. 往细菌沉淀中加入20mL溶液A，充分振荡悬浮或吹打混匀。

 注意：充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。

3. 将裂解液全部转移到大离心吸附柱中，放入到配套的收集管中。

4. 6000rpm离心5-10分钟，弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA，而将基因组DNA和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液，可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。

5. 将10mL 通用预洗液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。

6. 重复上步一次。

7. 将10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。

8. 重复上步一次。

9.室温6000rpm 空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过。

10. 将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50mL塑料离心管中，加1mL 通用洗脱液(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳)，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。

11. 重复上步1次以便洗脱更多的质粒DNA。

12. 合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。



注意事项：

1．细菌培养时间一般为12-16小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。

2．菌体过多会造成裂解液粘稠透，需要充分吹打，否则容易堵塞离心柱。

3．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。

4．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL 过夜培养菌体可收获约10μg高拷贝质粒。

5．从生长旺盛的细菌中纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，它们就是还未来得及分开的相套的质粒，易被误判为基因组DNA。



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名称：一步离心式石蜡清除剂

货号：BTN70302

规格：100次

用石蜡包埋组织作为材料进行PCR的难题之一是如何有效去除石蜡，因为残留的石蜡不但会影响DNA提取，还会干扰PCR扩增。常规的脱蜡方法一般需要1-2小时的时间，需要多次离心，每次离心都会造成样品的丢失。本产品只需要一步离心，克服了常规方法的缺点。



产品特点：

1.快速简单，只需要离心一次，免去了反复换液和离心，减少了样品的丢失。

2. 脱蜡效果好，跟经典的二甲苯/乙醇法相当。

3. 即开即用，客户自己不需要准备额外的试剂。



产品组成：

成分	规格
溶液A	100mL
溶液B	7.5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。



使用方法：

1. 将1mL溶液A加入到1.5mL塑料离心管中。

2. 放入一片不超过25μm的石蜡包埋组织切片。

3.以zuì大速度振荡10秒。

4. 加入75μL溶液B。

5. 振荡10秒混合。

6. 7000 g离心2分钟，小心吸弃上清。

7.真空抽干机抽干离心管中残留的液体。此步骤约需要一小时。

8. 得到的石蜡包埋组织切片即可用于DNA提取。



名称：非酶RNA清除剂1.0

货号：BTN51203

规格：1.5mL

本品为非酶法质粒RNA和蛋白质污染的去除试剂，专用于从碱变性法纯化的质粒中去除其中的绝大部分RNA污染和大部分蛋白质污染。



产品特点：

1.GX，能去除质粒粗提物中80%左右的RNA污染和60%的蛋白污染。而常用的RNase或LiCl处理只能去除RNA，不能去除蛋白质污染。

2.快速，整个过程只需要十余分钟，不需要37℃保温。

3. 经过本产品处理过的样品，由于没有RNA和蛋白质的干扰，使用硅胶膜或其他吸附离心法吸附、回收质粒DNA的效率比没处理过的样品更高。

4. 价格不到RNase A的1/2，在质粒的大规模制备时成本优势更加明显。

5. 制备临床用(如基因ZL)的质粒DNA时，可以减少后期在临床报批、生产、质检和使用中的很多麻烦(使用生物来源的RNase A和蛋白酶时，容易带入对人体有害的内毒素、LPS等污染物)。



储存条件：常温运输和保存，有效期一年。



使用方法：



一、从碱变性澄清液中去除RNA和蛋白质

1. 将约1/5体积的RNA Scavenger加入到碱变性澄清液中(加溶液III后离心得到的上清液一般是450μl，所以需要加入50μl)。

2. 混匀后室温放置10分钟。

3.室温8000g离心10分钟。

4.转移上清到一新的离心管中，后续处理跟经典的方法一样(即加入等体积的异丙醇或两倍体积的乙醇,混匀后室温离心10分钟,弃上清液后用1mL 75%乙醇洗一次,短暂离心，去掉残留液体,加入适量TE缓冲液溶解质粒待用)。



二、从质粒粗提液中去除RNA和蛋白质

1、将1/4体积的RNA Scavenger-1直接加入到已经溶解在TE或其他溶解液的质粒DNA中。

2、混匀后室温放置10分钟。

3、室温8000g离心10分钟。

4、转移上清到一新的离心管中，加入等体积的异丙醇或两倍体积的乙醇。

5、混匀后室温离心10分钟。

6、弃上清液后用1mL 75%乙醇洗一次。

7、短暂离心，去掉残留液体。

8、加入适量TE缓冲液溶解质粒待用。



使用效果：



图注：用经典的碱变性法从1.5mL E.coli过夜培养液中提取的pGEM-3质粒粗提物(加溶液ⅡI离心上清)经过RNA Scavenger处理后(LA+RNA Scavenger)与未经处理的样品(AL)电泳比较。上样量为1/5。