Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒

 Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品描述

细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicative senescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性。但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。

本试剂盒正是基于SA β-gal活性变化的生物学特征而设计的，专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测的一种技术。本试剂盒以X-Gal为底物，通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。

本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。

产品组分

编号

组分

规格

保存

40754-A

清洗液A（Washing Buffer A）

60 ml

4ºC保存

40754-B

固定液B（Fixative Solution B）

60 ml

4ºC保存

40754-C

酸性液C（Acid Solution C）

120 ml

4ºC保存

40754-D

稀释液D（Dilution Buffer D）

38 ml

4ºC避光保存

40754-E

染色液E（Staining Solution E）

2 ml

-20ºC避光保存

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。

注意事项

1） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2） 本试剂盒固定液B存在一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意小心防护。

3）  染色液E刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解，之后用于染色实验。

4）  X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在 4ºC冰箱保存，但也需避免光照。

5）  细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3 h即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24 h。细胞染色最长孵育时间为 24 h。细胞呈现蓝色的部位即为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性部位。

6）  细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值，不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。

7）  本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿和各种孔数的细胞培养板，只需按照一定的比例调整工作液用量即可（参考表2）。

 Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用方法

1.实验前的准备工作：

1) 染色工作液配制

实验开始前，将试剂盒内各组分从冰箱内取出，置于室温回温15~20min。其中X-Gal溶液C置入冰槽里等待溶化。根据以下染色工作液配方表（表1），实验体系类型，检测样本数，统一配制单次实验需要的染色工作液总量。混匀后，置入37ºC恒温水槽里预热，即为染色工作液。

表1 染色工作液配方表

染色液D

10μl

染色液E

10μl

染色液F

930μl

X-Gal溶液C

50μl

注意：配制染色工作液时需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，对于二者的判定：聚丙烯容器可高压灭菌，而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行，如细胞培养常用的6孔板。

2）不同体系染色工作液用量

本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿，和各种孔数的细胞培养板，可参考下表2 调整染色工作液用量：

 Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒细胞培养类型

建议处理液 用量

载玻片（组织切片）

1 ml

载玻片培养皿

1 ml

35 mm 培养皿

1 ml

96 孔培养板

0.1 ml

48 孔培养板 

0.2 ml

24 孔培养板

0.25 ml

12 孔培养板

0.5 ml

6 孔培养板

1.0 ml

25      m2培养瓶

3.0 ml

注意：以上用量仅作为参考，对于染色工作液的实际用量以充分覆盖住细胞和组织为准。根据以上用量，本试剂盒对于6孔板，足够做100个样本的检测；对于24孔板，足够做400个样本的检测；对于96孔板，足够做1000个样本的检测。对于组织切片足够做100个样本检测。但是组织切片的厚度，大小对染色液用量的要求明显不同，必须做合理用量调整。

2. 6孔细胞培养板染色（贴壁细胞）：

1） 吸除细胞培养液，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。

注意：对于其他类型的培养板，固定液用量参照此比例进行操作。

2） 吸除固定液B，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。

3） 吸除清洗液A，每孔加入1ml预热的染色工作液，覆盖整个生长表面。

4） 37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色，可以用封口膜或保鲜膜封住6孔板防止液体蒸发。

注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。

5） 普通光学显微镜下观察和计数：表达SA β-gal的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2ml 清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天，或者加入封片剂封片后，4℃可保存较长时间。

3. 悬浮细胞染色：

1） 离心收集细胞至1.5ml离心管内，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。

2） 离心，吸除细胞固定液，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。

3） 离心，吸除清洗液A，每管加入0.5-1ml预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。

4） 37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色（注：避免液体蒸发）。

注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。

5） 取部分染色好的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，加入1ml清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天。也可取细胞用于涂片，加上封片剂封片后，4℃可保存较长时间。

4. 组织切片染色：

1） 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行；

2） 加入适当体积的固定液B，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15min。

3） 用清洗液A浸泡洗涤组织3次，每次不少于5min；

4） 吸除清洗液A，加入适当量的预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。

5） 37℃孵育过夜，可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发，把整个切片浸泡在染色工作液中。

注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
 Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒yb-1186    HO-8910(卵巢癌细胞)
yb-1187    Tca-8113(舌鳞癌细胞)
yb-1188    HCC 94 [HCC941122](子宫鳞癌细胞（高分化）)
yb-1189    A-431(表皮癌细胞)
yb-1190    HeLa 229(宫颈癌细胞)
yb-1191    CBRH-7919(肝癌细胞)
yb-1192    RH-35(肝癌细胞)
yb-1193    SHZ-88(乳腺癌细胞)
yb-1194    MLTC-1(睾丸间质细胞瘤细胞)
yb-1195    L6565(小鼠L6565白血病克隆细胞系)
yb-1196    F9(畸胎瘤细胞)
yb-1197    LLC Lewis(肺癌细胞)
yb-1198    C127(乳腺肿瘤细胞)
yb-1199    MFC(胃癌细胞)
yb-1200    B16(黑色素瘤细胞)
yb-1201    B16(黑色素瘤细胞)
yb-1202    P815(肥大细胞瘤细胞)
yb-1203    S-180(腹水瘤细胞)
yb-1204    RM-1(前列腺癌细胞)
yb-1205    SAC-IIC3(腹水瘤细胞)
yb-1206    NG108-15 [ 108CC15 ](小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞)
yb-1207    SAC-IIB2(腹水瘤细胞)
yb-1208    Hepa 1-6(肝癌细胞)
yb-1209    P388D1(淋巴瘤细胞)
yb-1210    P3X63Ag8.653(瘤细胞)
yb-1211    YAC-1(淋巴瘤细胞)
yb-1212    P3X63Ag8(瘤细胞)
yb-1213    EL4. IL-2(淋巴瘤细胞)
yb-1214    SP2/0(瘤细胞)
yb-1215    EL4(淋巴瘤细胞)
yb-1216    P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1](瘤细胞)
yb-1217    PIEC(猪髋动脉内皮细胞)
yb-1218    CRFK(猫肾细胞)
yb-1219    EBTr (NBL-4)(牛胚气管细胞)
yb-1220    F81(猫肾细胞)
yb-1221    Mv.1.Lu(NBL-7)(貂肺上皮细胞)
yb-1222    MDCK (NBL-2)(狗肾细胞)