Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒_详细资料

产品信息

供应商：上海信裕数量： 1 保质期： 6个月保存条件： 4℃保存

Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品描述
细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicativesenescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性，但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。
本试剂盒正是基于活性变化的生物学特征而设计的，专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测的一种技术。本试剂盒以X-Gal为底物，通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。
本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感，特异性高。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。
产品组分

组分编号 组分名称 规格保存

40754-A A（Washing Buffer A） 100 ml 4ºC或-20℃保存

40754-B B（Fixative Solution B） 100 ml -20℃保存

40754-C X-Gal溶液C（X-Gal Solution C） 5 ml -20℃避光保存

40754-D 染色液D（Staining Solution D） 1 ml -20℃保存

40754-E 染色液E（Staining Solution E） 1 ml -20℃保存

40754-F 染色液F（Staining Solution F） 100 ml -20℃保存

Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本试剂盒固定液B存在一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意小心防护。

染色液E刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解，之后用于染色实验。

X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在 4ºC冰箱保存，但也需避免光照。

细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3 h即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24 h。细胞染色最长孵育时间为 24 h。细胞呈现蓝色的部位即为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性部位。

细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值，不能用于细胞培养的CO₂培养箱中进行染色反应。因为CO₂培养箱中较高浓度的CO₂会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。

本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿和各种孔数的细胞培养板，只需按照一定的比例调整工作液用量即可（参考表2）。
使用方法

实验前的准备工作：

染色工作液配制
实验开始前，将试剂盒内各组分从冰箱内取出，置于室温回温15~20min。其中X-Gal溶液C置入冰槽里等待溶化。根据以下染色工作液配方表（表1），实验体系类型，检测样本数，统一配制单次实验需要的染色工作液总量。混匀后，置入37ºC恒温水槽里预热，即为染色工作液。
表1 染色工作液配方表

染色液D 10μl

染色液E 10μl

染色液F 930μl

X-Gal溶液C 50μl

Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒注意：配制染色工作液时需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，对于二者的判定：聚丙烯容器可高压灭菌，而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行，如细胞培养常用的6孔板。
2）不同体系染色工作液用量
本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿，和各种孔数的细胞培养板，可参考下表2调整染色工作液用量：

细胞培养类型 建议处理液 用量

载玻片（组织切片） 1 ml

载玻片培养皿 1 ml

35 mm 培养皿 1 ml

96 孔培养板 0.1 ml

48 孔培养板 0.2 ml

24 孔培养板 0.25 ml

12 孔培养板 0.5 ml

6 孔培养板 1.0 ml

m²培养瓶

3.0 ml

注意：以上用量仅作为参考，对于染色工作液的实际用量以充分覆盖住细胞和组织为准。根据以上用量，本试剂盒对于6孔板，足够做100个样本的检测；对于24孔板，足够做400个样本的检测；对于96孔板，足够做1000个样本的检测。对于组织切片足够做100个样本检测。但是组织切片的厚度，大小对染色液用量的要求明显不同，必须做合理用量调整。

6孔细胞培养板染色（贴壁细胞）：

吸除细胞培养液，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。
注意：对于其他类型的培养板，固定液用量参照此比例进行操作。

吸除固定液B，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。

吸除清洗液A，每孔加入1ml预热的染色工作液，覆盖整个生长表面。

37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色，可以用封口膜或保鲜膜封住6孔板防止液体蒸发。
注意：37℃孵育不能在CO₂培养箱中进行，因其内高浓度的CO₂会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
5）普通光学显微镜下观察和计数：表达SA β-gal的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2ml 清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天，或者加入封片剂封片后，4℃可保存较长时间。

悬浮细胞染色：

离心收集细胞至1.5ml离心管内，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。

离心，吸除细胞固定液，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。

离心，吸除清洗液A，每管加入0.5-1ml预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。

37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色（注：避免液体蒸发）。
注意：37℃孵育不能在CO₂培养箱中进行，因其内高浓度的CO₂会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。

取部分染色好的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，加入1ml清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天。也可取细胞用于涂片，加上封片剂封片后，4℃可保存较长时间。

组织切片染色：

对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行；

加入适当体积的固定液B，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15min。

用清洗液A浸泡洗涤组织3次，每次不少于5min；

吸除清洗液A，加入适当量的预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。

7℃孵育过夜，可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发，把整个切片浸泡在染色工作液中。
注意：37℃孵育不能在CO₂培养箱中进行，因其内高浓度的CO₂会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒
xy-axbz-023   小鼠瘤细胞   FO   规格25毫升/株.
xy-axbz-024   小鼠淋巴瘤细胞   Yac-1   规格25毫升/株.
xy-axbz-025   小鼠淋巴瘤细胞   EL4   规格25毫升/株.
xy-axbz-026   小鼠淋巴瘤细胞   EL4.IL-2   规格25毫升/株.
xy-axbz-027   小鼠黑色素瘤细胞   B16F1   规格25毫升/株.
xy-axbz-028   鼠黑色素瘤细胞系   B16-Fo   规格25毫升/株.
xy-axbz-029   小鼠黑色素瘤高转移细胞   B16F10   规格25毫升/株.
xy-axbz-030   小鼠黑色素瘤细胞   B16BL6   规格25毫升/株.
xy-axbz-031   小鼠黑色素瘤细胞   B16   规格25毫升/株.
xy-axbz-032   小鼠SRSV转化的3T3细胞   SRSV/3T3   规格25毫升/株.
xy-axbz-033   小鼠胚胎成纤维细胞   BALB/3T3 clone A31   规格25毫升/株.
xy-axbz-034   小鼠肝癌细胞   H22   规格25毫升/株.
xy-axbz-035   小鼠肝癌细胞   Hepa 1-6   规格25毫升/株.
xy-axbz-036   大鼠肝癌细胞   CBRH-7919   规格25毫升/株.
xy-axbz-037   大鼠肝癌细胞   RH-35   规格25毫升/株.
xy-axbz-038   小鼠畸胎瘤细胞   F9   规格25毫升/株.
xy-axbz-039   小鼠畸胎瘤细胞   P19   规格25毫升/株.
xy-axbz-040   大鼠神经胶质瘤细胞   C6   规格25毫升/株.
xy-axbz-041   小鼠脑神经瘤细胞   Neuro-2a   规格25毫升/株.
xy-axbz-042   大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞   PC12   规格25毫升/株.
编号   中文   英文名称   规格25毫升/株.
xy-axbz-043   大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)   PC-12   规格25毫升/株.
xy-axbz-044   大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化)   PC-12   规格25毫升/株.
xy-axbz-045   大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)   PC-12   规格25毫升/株.
xy-axbz-046   小鼠睾丸间质细胞瘤细胞   MLTC-1   规格25毫升/株.
xy-axbz-047   小鼠前列腺癌细胞   RM-1   规格25毫升/株.
xy-axbz-048   小鼠肛门肉瘤细胞   S-180   规格25毫升/株.
xy-axbz-049   鼠肝星形细胞   HSC-T6   规格25毫升/株.
xy-axbz-050   大鼠正常肝细胞   BRL-3A   规格25毫升/株.
xy-axbz-051   大鼠肝细胞   BRL大鼠Buffalo   规格25毫升/株.
xy-axbz-052   小鼠成纤维细胞   3T3   规格25毫升/株.
xy-axbz-053   小鼠Mo-MuLv感染的3T3细胞   Mo-MuLV/3T3   规格25毫升/株.
xy-axbz-054   小鼠成纤维细胞   3T3NIH   规格25毫升/株.
xy-axbz-055   逆转录病毒包装的NIH3T3细胞   PA317   规格25毫升/株.

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组分编号	组分名称	规格	保存
40754-A	A（Washing Buffer A）	100 ml	4ºC或-20℃保存
40754-B	B（Fixative Solution B）	100 ml	-20℃保存
40754-C	X-Gal溶液C（X-Gal Solution C）	5 ml	-20℃避光保存
40754-D	染色液D（Staining Solution D）	1 ml	-20℃保存
40754-E	染色液E（Staining Solution E）	1 ml	-20℃保存
40754-F	染色液F（Staining Solution F）	100 ml	-20℃保存

染色液D	10μl
染色液E	10μl
染色液F	930μl
X-Gal溶液C	50μl

细胞培养类型	建议处理液用量
载玻片（组织切片）	1 ml
载玻片培养皿	1 ml
35 mm 培养皿	1 ml
96 孔培养板	0.1 ml
48 孔培养板	0.2 ml
24 孔培养板	0.25 ml
12 孔培养板	0.5 ml
6 孔培养板	1.0 ml
m²培养瓶	3.0 ml