问:常用的DNA 浓度及纯度检测方法有哪些?
低熔点琼脂糖2.5g说明书称答:回收得到的DNA段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。琼脂糖凝胶电泳通过对比定量的Marker 来定量浓度;紫外分光检测OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之间说明所得 DNA 纯度较好,如果洗脱时不使用溶液Eluent而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但不表示纯度低。
问:长片段回收时应注意哪些问题?
答:低熔点琼脂糖2.5g说明书当DNA 段长度较长(5 kb 以上)时,回收效率会有所下降,这是DNA 切胶回收时的常见现象。此时建议按以下方法解决问题:
1 适当增加待回收DNA 样品的点样量;
2 由于长段DNA 不易从树脂上洗脱下来,建议洗脱两次,可以提高洗脱效率;
3 减少操作过程中对长段DNA 的物理损伤,如混合振荡操作不要过于剧烈,切胶时不要将DNA 长时间暴露在紫外等下。
低熔点琼脂糖2.5g说明书的详细介绍:
DNA提取流程图:
公司低熔点琼脂糖2.5g说明书的RNA/DNA提取目录有下面10个系列,5000余种产品:点击了解更核酸电泳及回收。
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
实验步骤:
(1)低熔点琼脂糖2.5g说明书实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
注意事项:
● 低熔点琼脂糖2.5g说明书溶液PE *次使用前请按瓶上标签加入4 倍体积的无水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 无水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。
● 本产品对电泳使用的Agarose 种类没有严格限制,可以使用普通Agarose 。为了保证回收DNA 的质量和DNA 回收效率,希望使用高纯度的Agarose ,但没有必要一定要使用低熔点的Agarose 等。
● 电泳时请使用新鲜配制的TAE 电泳缓冲液,以免影响电泳及回收效果。
● 请适当延长电泳时间,在条带分离清晰后进行切胶回收,以免回收到多余杂带。
● 为提高DNA 回收收率,切胶时应尽量除去多余的胶块。
● 本试剂盒纯化柱的DNA 吸附能力强。但如果DNA 浓度小,或DNA 初始量少,回收率将会偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。
● 为了保证回收效率,请不要使用未调整pH 值的超纯水洗脱目的段。
● 请严格按照操作步骤操作。
三甲基乙酸(<99%,BR) Trimethylacetic acid 75-98-9 质量规格:<99%,BR
三甲基-β-环糊精(<98.0%(HPLC)) Trimethyl-β-cyclodextrin 55216-11-0 质量规格:<98.0%(HPLC)
三甲基[3-(三乙氧基硅基)丙基]氯化铵(<98.0%(T)) Trimethyl[3-(triethoxysilyl)propyl]ammonium Chloride 84901-27-9 质量规格:<98.0%(T)
三环唑标准溶液(10μg/ml,u=2%) Tricyclazol solution 41814-78-2 质量规格:10μg/ml,u=2%
三环唑标准溶液(100μg/ml,u=2%) Tricyclazol solution 41814-78-2 质量规格:100μg/ml,u=2%
三环[6.4.0.02,7]十二烷-1,8:2,7-四羧酸二酐(<98.0%(GC)) Tricyclo[6.4.0.02,7]dodecane-1,8:2,7-tetracarboxylic Dianhydride 738-90-9 质量规格:<98.0%(GC)
三甘醇二乙酸酯(<98.0%(GC)) Triethylene Glycol Diacetate 111-21-7 质量规格:<98.0%(GC)
三氟胸苷;三氟尿苷(TFT) Trifluridine; Trifluorothymidine 70-00-8 质量规格:<98%
三丁基碘化锍(<96.0%(T)) Tributylsulfonium Iodide 18146-62-8 质量规格:<96.0%(T)
三碘代甲状腺素钠盐 Liothyronine sodium 20241 质量规格:<97.0%,BR
三醋酸甘油酯(<98%,BR) Glycerol triacetate 102-76-1 质量规格:<98%,BR
三苯双脒(标准品) tribendimidine 115103-15-6 质量规格:UV法含量测定
三苯胂氧化物 Triphenylarsine oxide 1153-05-5 质量规格:BR
三苯甲基坎地沙坦西来替昔酯 Trityl candesartan cilexetil 170791-09-0 质量规格:<99%
三苯基溴化锍(<98.0%(T)) Triphenylsulfonium Bromide 3353-89-7 质量规格:<98.0%(T)
三白草酮(标准品) Sauchinone 177931-17-8 质量规格:HPLC≥98%,标准品
三(羟甲基)甲基甘氨酸(标准品) Tricine 1389475 质量规格:HPLC<99%,日本进口
三(6,6,7,7,8,8,8-七氟-2,2-二甲基-3,5-辛二酮基)镨(Ⅲ)(<97.0%(T)) Tris(6,6,7,7,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-octanedionato)praseodymium(III) 17978-77-7 质量规格:<97.0%(T)
三(4-碘苯)胺(<96.0%(GC)) Tris(4-iodophenyl)amine 4181-20-8 质量规格:<96.0%(GC)
低熔点琼脂糖2.5g说明书Eupatilin规格:HPLC≥98%,标准品
EupalinolideB规格:HPLC≥98%,标准品
EupalinolideA规格:HPLC≥98%,标准品
Eugenol规格:HPLC≥99%,标准品
Etravirine-d6规格:美国进口
Etravirine-13C3规格:美国进口
Etravirine规格:<98%
Etoposide规格:<98%,进分,sigmaE1383
Etoposide规格:<98%,BR,可用于细胞培养
Etoposide规格:HPLC<98%,标准品