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细胞名称 人胚肾细胞;293 [HEK-293]说明书
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 早期报道中指出该细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA,但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现,Ad5的1~4344位线性核苷酸整合入细胞染色体19q13.2。该细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主。可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体,由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。生物安全级别为2级。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:10~1:20传代,每2~3天换液1次。
传代情况 P20
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:7,12;D13S317:12;D16S539:9,13;D18S51:17,18;D19S433:15,18;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8,9;D7S820:11;D8S1179:12,14;FGA:23;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,19;
同工酶
染色体
使用权限 A类
人胚肾细胞;293 [HEK-293]说明书操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
人胚肾细胞;293 [HEK-293]说明书注意事项:
1. 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
人胚肾细胞;293 [HEK-293]说明书美国菌种保藏ZX, 又称美国模式菌种收集ZX(ATCC),是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的,非赢利性组织。目前它可以提供各种动植物细胞、标准品、菌株达两万多种。ATCC成立于1925年,是世界上zui大的生物资源ZX,由美国14家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理,是一家性、非盈利生物标准品资源ZX。ATCC向发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品,推动科学研究的验证、应用及进步 ATCC可以提供以下类别生物标准品:细胞株(3000多种);菌株(15000多种);动植物病毒株(2500多种)以及重组物质等。
TGFBR3 Others Human 人 TGFBR3 / Betaglycan 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
恒河猴肾细胞;RM-1
胰岛β细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
恒河猴皮肤细胞;RM-S1 人结肠癌细胞,LoVo细胞 TE-1(食管癌细胞)
人癌细胞;MCF 7B
CD200R4 Others Mouse 小鼠 CD200R4 / CD200 Receptor 4 / CD200RLa 人细胞裂解液 (阳性对照)
UT-7 人原巨核细胞性白血病细胞 1ml/T75
Hep 3B2.1-7 人肝癌细胞 1ml/T75
HHCC 人肝癌细胞 1ml/T75
HB611 人肝癌细胞 1ml/T75
tTA基因修饰的小鼠癌细胞(B类);Pan02-CAG-tTA-3E6
人细胞;Hela S3 [HeLaS3]
CCL21 Others Human 人 CCL21 / 6Ckine 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
A-431细胞,表皮癌细胞 人耐VCR胃腺癌细胞,SGC-7901/VCR细胞 猪小肠上皮细胞;ZYM-DIEC02
人脑膜细胞裂解物HMCL
SERPINF1 Others Mouse 小鼠 SerpinF1 人细胞裂解液 (阳性对照)
小鼠DNA(胞嘧啶-5)甲基转移酶3A(DNMT3A)ELISA试剂盒 ,英文名: DNMT3A ELISA Kit
大鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA检测试剂盒RatFactorⅧ-relatedAigen,FⅧAgELISAKit 96T/48T
人DAB2互作蛋白(DAB2IP)免疫试剂盒 Human DAB2IP ELISA Kit
英文名称MouseBonemorphogeneticprotein2ELISAKit小鼠骨成型蛋白质-2(BMP-2)规格:96T/48T
冰冻切片磷脂尼罗红(NileRed)荧光染色试剂盒50次
Ratai-IVIgGaibodyELISA试剂盒大鼠抗IVIgG抗体ELISA试剂盒规格:96T/48T
大鼠催产素受体(OX)ELISA试剂盒 ,英文名: OX ELISA Kit
P cadherin / placeal cadherin (P-cad) ELISA Kit 人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白(P-cad)ELISA试剂盒
Ratbrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit 大鼠脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
CLIAKitforCTGF(Humanconnectivetissuegrowthfactor)ELISAKit人结缔组织生长因子规格:48T/96T
细胞糖原磷酸化酶(GLYCOGENPHOSPHORYLASE)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒10次
Ratendotoxin,EISAKit大鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒规格:96T/48T
人胚肾细胞;293 [HEK-293]说明书小鼠信号素3E(SEMA3E)ELISA试剂盒 ,英文名: SEMA3E ELISA Kit
兔子脂联素(ADP)ELISA检测试剂盒rabbitadiponectin,ADPELISAKit 96T/48T
牛总蛋白S(TPS)免疫试剂盒 Bovine Total protein S,TPS ELISA Kit
英文名称HumanFIXELISAKit人凝血因子IX(FIX)规格:96T/48T
蛋白免疫杂交封闭溶液100毫升
Ratmonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP-1/MCAFELISA试剂盒大鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒规格:96T/48T