公司提供的RNA/DNA 提取,完善的实验条件,先进的设备,高素质的实验人员,保证您Sephadex G50 介质10mL售后服务的实验得以良好的完成。我们承诺一对一的专门服务,您可以全称参与了解实验进程。
Sephadex G50 介质10mL售后服务的详细介绍:
服务流程
1)客户提供材料
2)提取基因组RNA/DNA并确定其品质
客户提供
●新鲜材料或正确保存条件下材料(组织、细胞、细菌等)
●4℃保存一周,-20℃保存一个月,-80℃保存一年血液样品(EDTA,肝素,柠檬酸钠抗凝)
●详细的背景资料:来源、特点、类型等
我们提供
基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证
高纯度RNA/DNA、完整性
货期
3-5个工作日
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
bundling)、磷酸转移酶(phosphotransferase)激活、核内RNA出核、DNA复制与DNA修复。一些生理因素,诸如低氧(hypoxia)和尿糖(diabetes),可以增加GAPDH在特定细胞中的表达。GAPDH存在于几乎所有的组织中,以高水平持续表达。
GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组 GAPDH蛋白几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参,是很好的内参抗体。
GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。在实验中,可能存在总蛋白浓度测定不准确;或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差;这些误差需要通过测定每个样品中实际转到膜上的GAPDH的含量来进行校正,所以一般的western实验都需要进行内参设置。具体校正的方法就是将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除,得到每个样品目的蛋白的相对含量。然后才进行样品与样品之间的比较。
英文名称 Anti-GAPDH(3E12)-Loading Control
中文名称 3-磷酸甘油醛脱氢酶单克隆抗体(内参抗体) Phospho-LATS1 磷酸化肿瘤YZ基因LATS1试剂盒
phospho-LKB1 磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶试剂盒
phospho-LKB1 磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶试剂盒
Phospho-LKB1 磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶试剂盒
GNRH 黄体激素释放激素类似物试剂盒
Phospho-Lamin A + C 磷酸化核纤层蛋白A/C试剂盒
Phospho-Lck 磷酸化淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶试剂盒
Lyn 膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn试剂盒
Phospho-Lyn 磷酸化膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn试剂盒
Phospho-Lyn 磷酸化膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn试剂盒
LRRC4 脑瘤相关基因试剂盒
LSAMP 大脑边缘系统相关膜蛋白试剂盒
LRFN2 神经突触粘附样分子1试剂盒
LRFN4 富含亮氨酸重复序列/Ⅲ型纤维连接蛋白4试剂盒
Laminin alpha 4 层粘蛋白α4试剂盒
Laminin alpha 4 层粘蛋白α4试剂盒
lipocalin 1 脂质运载蛋白1试剂盒
Lymphotactin 淋巴细胞趋化因子试剂盒
LRP5L 低密度脂蛋白受体5样蛋白试剂盒