1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
内毒素清除专用亲和介质5mL售后服务主要特点是:
1.非冻保存提取RNA用的新鲜组织,在37℃下可保存1天,25℃下可保存1周,4℃下可保存1月,在-20℃或-80℃下可长期保存。其间样品可反复冻融十多次。
2.应用范围广,可用于保存,邮寄和运输病毒、***、果蝇、植物组织、动物组织、培养细胞、悬浮细胞(白细胞、流式细胞仪收集的细胞)等。
3.兼容性广,RNALOCKER保存的样品可以直接用于RNA提取也可直接用于组织切片、免疫学和流式细胞分析。
4.结果准确,本产品进入细胞后能迅速锁定RNA水平,使实验结果更能准确反映取样时基因表达谱的真实状态。
使用及效果:
迅速将新鲜组织剪薄(0.5厘米以下)并按每克组织加10 mL RNALOCKER的比例浸没在适量RNALOCKER中,在适当温度保存即可。
内毒素清除专用亲和介质5mL售后服务注意事项:
1. 组织和细胞取材速度要快,在获取后应当尽快浸入RNAwait,以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存,因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取:样本从-20℃或-80℃冰箱取出后,复苏到室温后,取出组织块,再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞,去除RNAwait,再 用于提取RNA。后继的处理(如组织匀浆)可以在室温下进行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
CFN9985818524-94-2390.4Iridoids>=98%20mgLoganinC17H26O10http://www.chemfaces.com/natural/Loganin-CFN99858.html
CFN99915302-27-2645.75Alkaloids>=98%20mgC34H47NO11http://www.chemfaces.com/natural/-CFN99915.html
CFN9991819408-84-5307.43Alkaloids>=98%20mgDihydrocapsaicinC18H29NO3http://www.chemfaces.com/natural/Dihydrocapsaicin-CFN99918.html
CFN9992698-92-0122.13Alkaloids>=99%50mgNicotinamideC6H6N2Ohttp://www.chemfaces.com/natural/Nicotinamide-CFN99926.html
CFN9992794238-00-3976.96Diterpenoids>=97%20mgCrocin IC44H64O24http://www.chemfaces.com/natural/Crocin-CFN99927.html
CFN9993077-95-2192.17Miscellaneous98%20mgD-(-)-Quinic acidC7H12O6http://www.chemfaces.com/natural/D-Quinic-acid-CFN99930.html
CFN999364368-28-9319.27Alkaloids>=99%1mgTetrodotoxinC11H17N3O8http://www.chemfaces.com/natural/Tetrodotoxin-CFN99936.html
CFN9993865995-63-31084.72Phenols>=98%20mgPunicalaginC48H28O30http://www.chemfaces.com/natural/Punicalagin-CFN99938.html
CFN99939110623-72-8838.8Flavonoids>=98%20mgEpimedin AC39H50O20http://www.chemfaces.com/natural/Epimedin-A-CFN99939.html