细胞名称 人非小细胞肺癌细胞;HCC827操作步骤
形态特性 上皮样;多角形
生长特性 贴壁生长
特征特性 这株细胞建于1994年三月。这株肺腺癌在EGFR酪氨酸激酶区域有一个获得性突变(E746-A750缺失)。 患者在25岁到26岁时每个月抽1包烟。 在诊断前12年不再抽烟。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1:2传代;4-5天传代一次。
传代情况
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11;D13S317:9;D16S539:12;D18S51:13;D19S433:14;D21S11:31;D2S1338:17,24;D3S1358:17;D5S818:12;D7S820:11,12;D8S1179:12;FGA:22,24;TH01:6;TPOX:8;vWA:18
同工酶
染色体
使用权限 A类
人非小细胞肺癌细胞;HCC827操作步骤细胞培养
1、冷冻管应如何解冻?
取出冷冻管后, 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须注意安全, 预防冷冻管之爆裂。
2、细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除DMSO?
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外, 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞), 在解冻之后, 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中, 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
3、可否使用与原先培养条件不同之培养基?
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基, 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基, 细胞大都无法立即适应, 造成细胞无法存活。
4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类?
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源, 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
人非小细胞肺癌细胞;HCC827操作步骤复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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