猴脉络膜-视网膜细胞(内皮) , RF/6A细胞5×10^5以上/1ml
对于大多数细胞研究工作者来说,猴脉络膜-视网膜细胞(内皮) , RF/6A细胞污染那可是个糟糕的事情,也是比较容易出现的情况,我们如何防范,如何避免,是我们要学习和掌握的。
人血清素/血清胺(ST)ELISA试剂盒 Human Serotonin,ST ELISA KIT 96T/48T
人细胞毒素(CTX)ELISA试剂盒 Human cytotoxin,CTX ELISA KIT 96T/48T
人α突触核蛋白(α-SYN)ELISA试剂盒 Human α-Synuclein,α-SYN ELISA KIT 96T/48T
猴脉络膜-视网膜细胞(内皮) , RF/6A细胞人糖链抗原19-9(CA19-9)ELISA试剂盒 Human Carbohydrate antigen19-9,CA19-9 ELISA KIT 96T/48T
人水蛭素(HRD)ELISA试剂盒 Human Hirudin,HRD ELISA KIT 96T/48T
人他克莫司(FK506)ELISA试剂盒 Human Tacrolimus-FK506 ELISA KIT 96T/48T
人上皮特异性抗原(ESA)ELISA试剂盒 Human epithelial specific antigen,ESA ELISA KIT 96T/48T
人上皮膜抗原(EMA)ELISA试剂盒 Human Epithelial membrane antigen,EMA ELISA KIT 96T/48T
下面我们对细胞培养中常见的污染情况,做个总结:
1)原虫:培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,zui终形成恶性循环。
2)霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差,用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有细胞暂时转移,采用过氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后,再移入细胞。孵箱应定期清洁(2月左右),尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外灯照。预防霉菌污染,可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗;但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞。,将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只是个别污染,可能是操作问题,就要注意操作。
3)细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够!尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意!下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象! 可在培养液中加相应的抗生素处理
4)黑蛟虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率。
5)真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。
6)支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。
污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中(不加细胞),37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长就是操作的问题。 也可以在培养基中事先加入双抗(硫酸链霉素和氨苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果。1、孵箱应定期用三氧机消毒或者 紫外光照射,并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素3、超净台的风机不能过大,风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水喷洒中和,约几小时即可进入操作。
人β-促脂素(β-LPH)ELISA试剂盒 Human β-lipotropic hormone,β-LPH ELISA KIT 96T/48T
人脂磷壁酸(LTA)ELISA试剂盒 Human lipoteichoic acids,LTA ELISA KIT 96T/48T
人乙胺碘呋酮(AD)ELISA试剂盒 Human amiodarone,AD ELISA KIT 96T/48T
人唾液酸(SA)ELISA试剂盒 Human Sialic acid,SA ELISA KIT 96T/48T
人鞘磷脂(SM)ELISA试剂盒 Human sphingomyelin,SM ELISA KIT 96T/48T
人尿游离皮质醇(UFC)ELISA试剂盒 Human urinary free cortisol,UFC ELISA KIT 96T/48T
人抗酿酒酵母抗体(ASCA)ELISA试剂盒 Human Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody,ASCA ELISA KIT 96T/48T
人迟现抗原4(VLA4)ELISA试剂盒 Human very late appearing antigen 4,VLA4 ELISA KIT 96T/48T
人吖啶橙(AO)ELISA试剂盒 Human Acrine Orange,AO ELISA KIT 96T/48T
人甲胺喋呤(MTX)ELISA试剂盒 Human methotrexate,MTX ELISA KIT 96T/48T
人对氨基苯甲酸(PABA)ELISA试剂盒 Human para-aminobenzoic acid,PABA ELISA KIT 96T/48T
人苯丙氨酸(LPA)ELISA试剂盒 Human L-phenylalanine,LPA ELISA KIT 96T/48T
人免疫核糖核酸(Irna)ELISA试剂盒 Human Immune RNA,Irna ELISA KIT 96T/48T
人β萘酚(β-Nph)ELISA试剂盒 Human Beta-naphthol,β-Nph ELISA KIT 96T/48T
人β内酰胺酶YZ剂(BLI)ELISA试剂盒 Human β-Lactamase inhibitors,BLI ELISA KIT 96T/48T
人α半乳糖基抗体(Gal)ELISA试剂盒 Human α-galactoyl,Gal ELISA KIT 96T/48T
人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒 Human αN-acetylglucosaminidase,αNAG ELISA KIT 96T/48T
人α2纤溶酶YZ物(α2-PI)ELISA试剂盒 Human α2-plasmin inhititor,α2-PI ELISA KIT 96T/48T
人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA试剂盒 人高香草酸(HVA) ELISA KIT 96T/48T
人钙粘蛋白相关的神经受体1(CNR-1)ELISA试剂盒 Human cadherln-related neuronal receptor1,CNR-1 ELISA KIT 96T/48T
人毛细血管扩张性共济失调突变基因(ATM)ELISA试剂盒 Human Ataxia angiectasia mutated,ATM ELISA KIT 96T/48T
人芳香烃受体(AhR)ELISA试剂盒 Human aryl hydrocarbon receptor,AhR ELISA KIT 96T/48T
人特异性巨噬细胞武装因子(SMAF)ELISA试剂盒 Human Specifie Macrophage Arming Paetot,SMAF ELISA KIT 96T/48T
人促有丝分裂因子(MF/MPF)ELISA试剂盒 Human maturation promoting factor,MF/MPF ELISA KIT 96T/48T
人转录因子抗体-1(ATF-1)ELISA试剂盒 Human activating transcription factor-1,ATF-1 ELISA KIT 96T/48T
人抗鼠抗体(HAMA)ELISA试剂盒 Human antimous antibody,HAMA ELISA 96T/48T
人抗鼠抗体(HAMA)ELISA试剂盒 Human antimous antibody,HAMA ELISA 96T/48T
人钙离子通道抗体(VGCC)ELISA试剂盒 Human voltage-gated calcium channel,VGCC ELISA KIT 96T/48T
人溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA试剂盒 Human Bromodeoxyuridine,BrdU ELISA KIT 96T/48T
人纤维母细胞表面抗原(FSP)ELISA试剂盒 Human Fibroblast surface protein,FSP ELISA KIT 96T/48T
人分泌性白细胞蛋白酶YZ因子(SLPI)ELISA试剂盒 Human secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI ELISA KIT 96T/48T
人阿黑皮素原(POMC)ELISA试剂盒 Human pro-opiomelanocortin,POMC ELISA KIT 96T/48T
人不对称二甲基精氨酸(ADMA)ELISA试剂盒 Human asymmetrical dimethylarginine,ADMA ELISA KIT 96T/48T