HR8089 真菌蛋白提取试剂盒(小型真菌)

特别提示：包括真菌蛋白提取试剂盒(小型真菌)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：真菌蛋白提取试剂盒(小型真菌)

英文名称：Fungal protein extraction kit (small fungi)

产品货号：HR8089

产品规格：50T|100T



真菌蛋白提取试剂盒适用于从各种除大型真菌(蕈菌)类以外的其他真菌类样本中提取总蛋白。包括各种丝状真菌(霉菌)、酵母样本。试剂盒组分针对真菌厚细胞壁样本进行优化，提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶YZ剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白样品可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

本试剂盒提取的蛋白样品含高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳，需要除盐后再上样。如下游实验需要样品可以直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。



储存条件：蛋白酶YZ剂、稳定剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。

有效期：一年。



注意事项：

●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或ZL。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品Pai的试剂混用，否则会影响使用效果。

● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。



产品特点：

1．使用方便。

2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

4．蛋白酶YZ剂YZ了蛋白的降解，蛋白酶YZ剂配方优化。蛋白酶YZ剂混合物包含7种独立的蛋白酶YZ剂；每一种YZ剂可特异性YZ某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以YZ几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。



试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒



使用方法：



使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

●蛋白酶YZ剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶YZ剂单品。



1．提取液制备：每500μl冷的真菌蛋白提取液中加入2μl蛋白酶YZ剂混合物，4μl蛋白稳定剂，混匀后置冰上备用。

2．取50-100mg 样本①，置于研钵中用液氮研磨。(没有液氮研磨条件也可直接加入提取液后置冰上研磨即可)

3．研磨后加入500μl真菌蛋白提取液。

4．混匀后，在4℃条件下振荡20-60分钟，至菌体基本完全裂解，无明显大量沉淀。

5.在4℃，14000g条件下离心10分钟。

6．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到真菌总蛋白。

7．将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。

注：

①用液氮研磨的方法更佳，具体方法可以联系本公司 索取详细资料。

② 建议用BCA 法进行蛋白定量。

③蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。



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货号	名称	规格
BTN131006	强RIPA裂解液	250mL
BTN131007	中等RIPA裂解液	250mL
BTN100214	预混型BCIP/NBT溶液	250mL
YT039	SDS裂解液	100ml
WE0292	Western中分子量蛋白Marker(20～110kD)	20次(100μl)
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名称：考马斯亮蓝R250

货号：YT950

规格：5g

本品是常用的蛋白染色剂。



分子式：C45H44N3O7S2Na

分子量：825.97



储存条件：室温。





名称：Protein A+G琼脂糖凝胶

货号：WE0268

规格：1ml

  本产品为Protein A和Protein G 共价交联到Agarose beads上的产物，并保存在20%乙醇溶液中。本产品包含1ml protein A+G agarose和1ml 20%乙醇溶液，即为50%悬浮介质。主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)。免疫沉淀抗体包括Mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA，Rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c，Rabbit IgG，Rabbit and Goat polyclonal Abs，以及Human IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。本产品也可以用于抗体的纯化。



注意事项：

1、本产品保存在2～8℃ 20%的乙醇中，从低温取出后恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。

2、使用前请充分颠倒若干次使混合均匀。



使用方法：



I 免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)：

1、蛋白样品的准备：

a. 对于细胞样品，用1×PBS洗涤一次。2×106细胞加入200μl细胞裂解液，以此类推。

b. 对于组织样品约20 mg加入200μl组织蛋白抽提试剂，以此类推。

注：如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释；如果蛋白样品浓度过低，可适当减少裂解液的用量。

2、取约200μg至1 mg蛋白样品，与0.2μg至2μg纯化后的抗体混合，4℃缓慢摇动过夜。

3、取20-40μl充分重悬的Protein A+G Agarose加入到一支新的1.5ml离心管中，短暂离心，小心吸弃上清。

4、加入500μl 1×PBS洗涤Protein A+G Agarose，短暂离心，小心吸弃上清。重复此步骤2次。

5、将步骤2的抗原抗体复合物加入到洗涤后的Protein A+G Agarose中，4℃孵育1-3个小时，短暂离心，小心吸弃上清。

6、加入500μl 1×PBS洗涤，短暂离心，小心吸弃上清。重复此步骤2次。

7、向沉淀中加入20-40μl 2×SDS-PAGE电泳上样缓冲液，涡旋重悬沉淀，短暂离心把样品离心至

8、蛋白煮沸变性5分钟，短暂离心后取部分或全部上清，用于SDS-PAGE电泳或Western Blot等。暂时不用的样品可在-20℃保存。



II 免疫共沉淀(CO-IP)：

参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(CO-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但以用新鲜的蛋白样品为佳。



储存条件：2～8℃，避免冻存。