SY0509 细胞增殖与示踪检测试剂盒

特别提示：包括细胞增殖与示踪检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：细胞增殖与示踪检测试剂盒

英文名称：CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

产品货号：SY0509

产品规格：500T|1000T



CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 是基于CFDA, SE对细胞进行示踪及增殖检测的试剂盒，由CFDA,SE粉末、溶剂及相关细胞染色缓冲液组成，该试剂盒主要工作原理为：CFDA, SE具有细胞膜渗透性，本身不具有荧光发光性。当通过被动运输穿透细胞膜进入活细胞后，可被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE），后者可发强烈的绿色荧光，不能穿透细胞膜，能完好的保留在胞内。CFSE还可自发性并不可逆地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上，同时过量且未被偶联的CFDA, SE通过被动扩散回到细胞外培养基内，被后续清洗步骤所清除。经CFDA, SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数月，因此非常适用于细胞群落分析。



CFDA, SE标记细胞的荧光非常均一，优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如PKH26，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪（FL1通道）根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次（1/2的荧光强度），二次（1/4的荧光强度），三次（1/8的荧光强度），以及更多分裂次数的细胞。CFSA，SE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFDA, SE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。CFDA, SEzuì常用于淋巴细胞的增殖检测，也可用于成纤维细胞，自然杀伤细胞，造血祖细胞等其他细胞的增殖检测。



CFDA, SE标记细胞呈绿色荧光，Ex=494nm，Em=521nm，除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。



本品为CFDA，SE细胞增殖与示踪检测试剂盒，包含配制CFDA，SE储存液所需的溶剂和细胞标记用的染色缓冲液，简化了实验前期准备工作。另，CFDA,SE标记细胞一般15min即可完成，对于不同细胞，需要自行摸索zuì佳标记时间。按照每个样本的标记体积为2ml计算。



注意事项

1）CFDA,SE易被水解，在水溶液中会很快变质。因此保存过程中粉末或者储存液都需干燥保存；而且使用过程中避免接触水。但在标记细胞的过程中和水接触是在许可范围内的。

2）CFDA,SE溶剂在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，于20-25℃水浴温育片刻至全部融解后方可使用。

3）不同的细胞其细胞内酯酶活性不同，因此染色效果具有差异性。

4）虽然本试剂盒已对CFDA,SE染色体系做了优化处理，但建议使用者根据自身的细胞类型，培养条件以及应用的不同来梯度摸索zuì佳的工作浓度，以zuì低浓度得到适宜的标记效率为准。

5）荧光染料均存在淬灭问题，染色过程需尽量避光。

6）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。



储存条件：-20℃，有效期1年



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名称：CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒

货号：YT157

规格：2000次

本试剂盒是基于一种新型荧光探针CFDA SE的用于细胞增殖检测和细胞荧光示踪的检测试剂盒。CFDA SE目前被广泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine掺入等其它细胞增殖检测方法。基于CFDA SE荧光标记的细胞增殖检测和[3H]-thymidine掺入、BrdU标记获得的检测结果完全一致，但同时可以提供更多的细胞增殖信息。使用CFDA SE检测可以提供整个细胞群中有多少比例的细胞分裂了1次、2次或更多次数，同时如果和其它荧光探针联用，可以获取不同分裂次数细胞的其它相关信息。



CFDA-SE的全称为Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，分子式为C29H19NO11，分子量为557.47，CAS number为150347-59-4。CFDA SE可以通透细胞膜，进入细胞后可以被细胞内的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶发性地(spontaneously)并不可逆地和细胞内蛋白的Lysine残基或其它氨基发生结合反应，并标记这些蛋白。在加入荧光探针CFDA SE后大约24小时，即可充分标记细胞。被CFDA SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数个月。CFDA SE标记细胞的荧光非常均一，比以前使用的其它细胞示踪荧光探针例如PKH26的荧光更加均一，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均匀。



由于CFDA SE标记细胞的荧光非常均匀和稳定，每分裂一次子代细胞的荧光会减弱一半，这样通过流式细胞仪检测就可以检测出没有分裂的细胞，分裂一次的细胞(1/2的荧光强度)，分离两次的细胞(1/4的荧光强度)，分裂三次的细胞(1/8的荧光强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。采用CFDA SE通过流式细胞仪检测获得的检测结果参考右图。每一个峰代表一种分裂次数的细胞，从右至左的峰通常依次为分裂0次、1次、2次、3次等次数的细胞。分裂次数较多后，分裂0次或1次等没有分裂或分裂次数较少的细胞会逐渐减少直至检测不到。



使用CFDA SE可以检测分裂多达8次或更多次数的细胞增殖。目前CFDA SE标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。zuì常用于淋巴细胞的增殖检测，也可以用于成纤维细胞、NK细胞等其它细胞的增殖检测，甚至还可以用于细菌增殖的检测。



CFDA SE标记细胞呈绿色荧光，检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为518nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。CFDA SE标记的细胞也可以用荧光显微镜进行观察。CFDA SE标记的细胞无论在体外还是体内都不会使邻近细胞染色。即CFDA SE荧光探针完成标记后不会从一个细胞转移到邻近细胞。CFDA SE标记细胞仅需5-15分钟即可完成。对于不同细胞，zuì佳标记时间需自行摸索。



本试剂盒提供了配制CFDA SE所需的溶液以及CFDA SE进行细胞标记时所需的配套试剂。如果每个检测样品的荧光探针标记体积为1ml，本试剂盒共可以检测2000个样品。