BTN121112 大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞

特别提示：包括大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞

英文名称：E.coli Stbl3 Chemical Competent Cell

产品货号：BTN121112

产品规格：0.1mL*10



本产品是衍生自大肠杆菌HB101菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞。特别适用于克隆不稳定载体片段，如含有同向重复序列的慢病毒DNA和其他反转录病毒载体。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达108。



产品特点：

1. 本产品是常规质粒制备的宿主菌，可进行蓝白斑筛选。

2. 本产品是复制慢病毒载体系统推荐使用的菌株，对慢病毒载体等较大的质粒转化的效果好，能够有效YZ长片段末端重复区的重组，减低错误重组的可能性。

3. 非常稳定，能提高慢病毒载体或其他不稳定载体的克隆效率。



菌株基因型：F– mcrB mrr hsdS20(rB–，mB–)recA13 supE44 ara-14 galK2lacY1 proA2 rpsL20(StrR)xyl-5 λ– leu mtl-1



储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。



自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。



使用方法：

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。

以下实验以50μL感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。

3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。

4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。



注意事项：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养

3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。



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