NHS21-5 高GC纳米PCR试剂盒_详细资料

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高GC纳米PCR试剂盒上海户实

产品目录号：NHS21-5

高GC纳米PCR试剂盒产品说明：本试剂盒既适用于高GC序列的扩增，也适用于一般PCR扩增。产品定位于解决目前市场上难于扩增的若干PCR反应。纳米PCR是纳米材料辅助的基因扩增技术,研究表明某些纳米材料可以增强基因扩增的总体效率。

高GC纳米PCR试剂盒25ul/250次配置如下：

2×NanoPCR buffer 11-1 (1000ul)；

2×NanoPCR buffer 11-2 (1000ul)；

2×NanoPCR buffer 11-3 (1000ul)；

dNTPs (2.5mM)(300ul)；

MgCl₂ (25 mM) (500ul)；

Taq DNA polymerase (5 U/ul) (60ul)

使用建议:

I）纳米材料容易聚集，每次使用前请震荡均匀再使用。PCR产物中含有的纳米材料一般不影响电泳等后续操作。

II）一个典型的PCR反应（举例：扩增一个高GC片段780bp）设计如下：

12ul反应

25ul反应

2×NanoPCR buffer-11

6.0 ul

12.0ul

dNTPs (2.5 mM)

1.0 ul

2.0ul

MgCl₂ (25 mM)

1.2 ul

2.5ul

Primer 1(2 uM)

0.8 ul

1.6ul

Primer 2(2 uM)

0.8 ul

1.6ul

Template DNA (~10 ng/ul)

0.2 ul

0.4ul

Taq DNA polymerase (5 U/ul)

0.2 ul

0.4ul

ddH₂O

1.8 ul

4.5ul

PCR程序举例：[94℃-5min]；[94℃-30s，56℃-30s，72℃-40s]×35 cycles（循环数可按照PCR产物的多少适当调节）；[72℃-5min]. 如果不确定退火温度，可以先做梯度PCR确定退火温度。

III）批量PCR需要计算并规划好实验中所需要混合的mix总量以及需要单独加入PCR体系中的成分和加量。例：做以不同基因组为模板的9管12ul体系的PCR。计入加样损耗，按10管加量计算。试验操作全过程建议在冰盒上进行。

12ul反应

2×NanoPCR buffer-11

6.0 ul

×10=60

dNTPs (2.5 mM)

1.0 ul

×10=6

MgCl2 (25 mM)

1.2 ul

×10=12

Primer 1(2 uM)

0.8 ul

×10=8

Primer 2(2 uM)

0.8 ul

×10=8

Template DNA (~10 ng/ul)

0.2 ul

单独添加

Taq DNA polymerase (5 U/ul)

0.2 ul

×10=2

ddH2O

1.8 ul

×10=18

按照上表所描述的将mix做好，并反复摇晃15-20下、上下振荡后离心（大约待离心机转到7000rpm随即停下来就好），离心后，用枪头分别加入相应基因组0.2ul的PCR管内，每管11.8ul并用枪头顺便混合3下使均匀。放入PCR仪进行PCR。

实验举例1：扩增以人类基因组为模板的38对序列引物。该38对高GC扩增产物GC>60%,大小均在700-800bp左右。38对退火温度基本一致。使用上述12ul扩增体系，使用NanoPCR试剂盒进行扩增的图片如图1所示。

图1 使用NanoPCR试剂盒扩增人类基因组38对引物的电泳图片

Marker为λ/Hind Ⅲ.

图2 使用国外某公司高GC试剂盒扩增人类基因组38对引物的电泳图片

图3 使用国内某公司高GC试剂盒扩增人类基因组38对引物的电泳图片

参考文献：

Haikuo Li etal. Nanoparticle PCR: Nanogold-assisted PCR with enhanced specificity. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44(32):5100-3

Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanopowder enhances the efficiency of polymerase chain reaction. Nanotechnology, 18 (2007) 355706

Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanotubes enhances the efficiency of long PCR. 2008, Biotechniques, 44(4):537-545

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保质期：12个月

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	12ul反应	25ul反应
2×NanoPCR buffer-11	6.0 ul	12.0ul
dNTPs (2.5 mM)	1.0 ul	2.0ul
MgCl₂ (25 mM)	1.2 ul	2.5ul
Primer 1(2 uM)	0.8 ul	1.6ul
Primer 2(2 uM)	0.8 ul	1.6ul
Template DNA (~10 ng/ul)	0.2 ul	0.4ul
Taq DNA polymerase (5 U/ul)	0.2 ul	0.4ul
ddH₂O	1.8 ul	4.5ul