WH0022 深加工食品DNA提取试剂盒

特别提示：包括深加工食品DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：深加工食品DNA提取试剂盒

英文名称：DNA extraction kit from deep-processing food

产品货号：WH0022

产品规格：100次



本试剂盒是特别针对食品原料和深加工食品的DNA提取试剂盒，成功提取到大豆粒、大米粒、玉米粒、饼干、方便面、豆腐、豆腐干、腐乳、豆浆、番茄酱、薯条、薯片、小馒头、粉条等食品的基因组DNA。无需酚/lǜ仿抽提，使用安全快捷方便，可zuì大限度去除食品中的蛋白、脂类及其他有机化合物等杂质。使用本试剂盒提取的食品DNA可适用于各种检测，包括PCR、荧光定量PCR等转基因检测实验。本试剂盒提取的DNA可用于加工食品PCR转基因检测、加工食品荧光定量PCR转基因检测等下游应用。



产品特点：

·专用性强：专为国家食品安全检测相关部门开发的加工食品DNA提取的专项产品。

·操作时间短：1h内即可获得高质量的加工食品DNA。

·害：无需使用酚/lǜ仿等有害试剂，操作安全。

·纯度高：获得的DNA纯度高，可直接用于PCR、荧光定量PCR等转基因检测实验。



试剂盒组成：

组分	100T
缓冲液GMO1	50ml
缓冲液GMO2	20ml
Proteinase K	2×1ml
洗脱缓冲液TE	15ml

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。



注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)

1．酱油、番茄酱等样品应进行预处理，以达到好的提取效果。特殊样品请咨询本公司后进行提取。

2．如果缓冲液GMO1中出现沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

3．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。



使用方法：

针对酱油含有较多焦糖色素、番茄酱pH值过低等不利于DNA提取的特点，在正式进入试剂盒提取之前，应对提取样品进行预处理。



酱油样品预处理：取酱油30ml，加入60 ml无水乙醇混匀，置冰箱（-20℃）放置10min后，10000rpm离心10min。弃上清，在沉淀中加入30ml 0.1M Tris.Cl（pH8.0)溶液，用力摇匀，全部转移至100 ml烧杯中，于磁力搅拌器上搅拌2 h。分装至1.5 ml离心管中，12000rpm离心10min。弃上清，加入1.5 ml 0.1M Tris.Cl（pH8.0)溶液，涡旋振荡至块状打散，12000rpm离心10min。弃上清，沉淀中的焦糖色素及盐等小分子已全部去除，可直接用于DNA提取。

番茄酱样品预处理：取番茄酱液态加工样品1.5 ml于离心管中，10000rpm离心15 min。弃上清，用1 ml 0.1M Tris.Cl溶液洗涤样品3次，振荡混匀，10000rpm离心15 min。弃上清，留沉淀待用。



1．称取研碎的深加工食品100mg或上述预处理的样品，加500μl缓冲液GMO1和20 μl的Proteinase K （20 mg/ml)，旋涡振荡1 min。

2．56℃孵育1h。孵育过程中每15 min振荡一次。

3．加入200 μl缓冲液GMO2，充分混匀，涡旋振荡1 min。室温静置10min。

4．12000rpm（~13400×g )离心5 min，将上清转移至新的离心管中。

5．向上清液中加入0.7倍体积的异丙醇，充分混匀。（例如500μl的水相溶液加350 μl异丙醇），12000rpm（~13400×g )离心3 min，弃上清，保留沉淀（此步沉淀可能看不见）。

  注意：加异丙醇沉淀后，弃上清应小心，防止把DNA倒出。

6．可选步骤：在步骤5加异丙醇之前，向上清液中加入1 μl Carrier RNA（酱油、番茄酱必加），再加入异丙醇。（Carrier RNA目录号：RT416-02）

7．加入700 μl 70%乙醇，涡旋振荡5 sec，12000rpm（~13400×g )离心2 min，弃上清。

8．重复操作步骤7。

  注意：弃上清应小心，防止把DNA倒出。

9．开盖倒置，室温5-10min，彻底晾干残余的乙醇。

  注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（PCR、荧光定量PCR等）实验。

10．加入20-50 μl洗脱缓冲液TE，旋涡振荡1 min，zuì终得到DNA溶液。



DNA提取效果检测：

由于深加工食品中DNA含量非常低，普通琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计等方法都不能很准确的检测，一般用PCR或荧光定量PCR来检测DNA提取效果。



如采用我公司2×Taq PCR MasterMix （目录号：WH0073)进行DNA提取效果检测（Lectin基因、Zein基因、Patatin基因检测）：



PCR反应体系的建立，20 μl体系如下：

加入物	加入量
2×Taq PCR MasterMix	10μl
引物-F（10μM)	0.5μl
引物-R（10μM)	0.5μl
模版	4μl
ddH2O	5μl

反应条件：



结果检测：反应结束后取5-10 μl反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。



根据您的关注的深加工食品DNA提取试剂盒，食品原料DNA提取试剂盒，您可能还对以下产品有需求：







名称：白细胞裂解液

货号：BTN130989

规格：250mL

本品为即用型白细胞裂解溶液，可以用于裂解分离纯化好的血液白细胞，用于DNA提取、RNA提取等后续实验。



储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。



使用方法：(以DNA提取为例)

1. 取新鲜抗凝血5mL，在10mL或15mL的塑料离心管中用红细胞裂解液裂解红细胞(红细胞裂解液有几种配方，用户需要根据所选产品的使用手册进行操作，这里不列出每种的详细步骤)，也可以直接2500rpm离心5分钟后取白细胞层到一新的10mL或15mL的塑料离心管中。

2.在所得的白细胞沉淀中或所得白细胞层溶液中加自备的生理盐水使得白细胞的终体积为2mL。

3. 加1mL的本产品，混匀后55℃ 保温3小时，其间轻轻振摇数次。

4. 加入3mL自备的Tris饱和酚，轻轻震摇5分钟，使得水相和酚相充分分开。

5. 3500rpm离心15分钟，上层水相含DNA，中间白色层为蛋白质，下层为酚相。

6. 将非常粘稠的含DNA的上清液转移到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。

7. 再用Tris饱和酚重复上面的抽提步骤，直到离心后中间层没有白色的蛋白出现为止。

8.在上清液中加入等体积的自备的lǜ仿，轻轻震摇5分钟，3500rpm离心5分钟，转移上清液到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。此步可以除去残留的酚。

9.在上清液中加入0.1倍体积的自备的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)和2倍体积的无水乙醇，轻柔颠倒混匀，将出现絮状的DNA沉淀。

10. 用移液枪头将DNA沉淀挑取出来，转移到1.5mL的塑料离心管中，用75%的乙醇浸泡2次。此操作可以去除DNA中残留的盐离子。

11.转移DNA沉淀到一个1.5mL的塑料离心管中，空气中放置10分钟左右待乙醇挥发后，加入0.5mL自备的TE缓冲液溶解DNA，4℃放置待用。



名称：菌体内毒素清除剂

货号：BTN90901

规格：200mL

内毒素是E.coli细胞壁的主要成分，传统的去除内毒素的方法是将内毒素和DNA一起纯化出来，然后再用各种方法去除其中的内毒素，操作繁琐，DNA 回收率低。本产品可以直接把E.coli 表面的内毒素去除，从根本上避免了内毒素对后续操作(如质粒DNA提取，重组蛋白质提取)的污染。



产品特点：

1. 在菌体收集阶段去除内毒素的产品，从源头上避免了内毒素跟DNA和胞浆蛋白的接触，从根本上防止了可能产生的污染。

2. 操作简单快速，用酶溶液温和清洗菌体3-4次即可去掉细菌表面的内毒素，只需要10分钟左右时间，不需要复杂仪器设备。

3.GX，能去除99%以上的内毒素。

4.跟各种质粒DNA提取、基因组DNA提取和蛋白质提取等操作兼容，DNA丢失率只有10%左右(其他方法DNA 丢失率可以高达50%)。

5. 不影响DNA和绝大部分蛋白质的活性，处理过的质粒DNA可用于转染实验。

6. 既可小规模使用(在1.5mL离心管内)，也可放量用于大规模无内毒素质粒DNA提取和无内毒素蛋白质纯化。



储存条件：常温运输和保存，有效期一年。



使用方法：



一：用于菌液小于3mL的样品

1. 收集1.5-3mL E.coli 饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。

2. 加入1mL 本产品温和混匀后10,000-12000rpm离心1分钟，弃上清(含内毒素)。

3. 再重复上述操作3-4次，得到的菌体可以直接进入后续的无内毒素质粒DNA提取或无内毒素蛋白质提取程序。



二：用于菌液多于3mL的样品

整个操作同上，只是在15或50mL塑料离心管中进行，离心速度不能超过离心管的承受力，本产品的用量按比例增加。



疑难解答：

Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?

A:因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同，所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附，离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子(类似于细胞膜的磷脂分子)，能够形成大小不等的聚合物，跟质粒DNA和蛋白质大小接近，所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和氯化铯超速离心)也不能将其有效分离。