特别提示:包括TOP10化学感受态细胞在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:TOP10化学感受态细胞
英文名称:TOP10?Chemically Competent Cell
产品货号:MQ0002
产品规格:20×100μl/100×100μl
TOP10菌株来源于MC1061菌株,是目前实验室zuì常用的感受态细胞之一,基因型与DH10B高度类似(DH10B为galE15型,而TOP10为galU型)。
TOP10生长速度快(比DH5α快,但比Mach1-T1生长速度慢),10小时可见克隆,recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
可用于构建克隆,蓝白斑筛选等实验,具有链霉素抗性。TOP10感受态细胞经特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg。
保存条件:-80℃
基因型:
F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL(StrR)endA1 nupG
操作说明:
1.TOP10感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少13h。
注意事项:
1.感受态细胞zuì好在冰上融化。
2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒或GX率的连接产物可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
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