ZN2942 双显色抗人IgG免疫组化试剂盒

特别提示：包括双显色抗人IgG免疫组化试剂盒(POD和FITC)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：双显色抗人IgG免疫组化试剂盒(POD和FITC)

英文名称：Double chromogenic Immunofluorescence kit for human IgG(FITC&POD)

产品货号：ZN2942

产品规格：1ml|2ml|5ml



本试剂盒适于人自身抗体的检测，是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。免疫组化双显色试剂盒采用荧光素 FITC 及过氧化物酶 POD 标记的链酶亲和素（SABC-FITC+SABC-POD）。FITC 在 490-495nm 激发，在 520-530nm 发射荧光，在荧光显微镜下呈明亮黄绿色。SABC-POD 在加入显色底物 DAB 显示后，染色呈棕黄色。用户根据实验需要，可在同一张切片上用两套显示系统观察。



试剂盒组成：

组分	规格
正常兔血清封闭液(稀释比1:10)	1ml/2ml/5ml
生物素化兔抗人IgG(参考效价1:100)	0.1ml/0.2ml/0.5ml
SABC-FITC((参考效价1:100)	0.1ml/0.2ml/0.5ml
SABC-POD(参考效价1:100)	0.1ml/0.2ml/0.5ml

另附有四个滴瓶可供稀释试剂用。



保存条件：4℃可保存一年，应避免冷冻。



石蜡片染色步骤：

1. 石蜡切片，常规脱蜡至水。

2. 3%H2O2去离子水室温孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性，PBS冲洗，5分钟×3次。

3. 根据需要选择抗原修FF式及强度。可热修复、酶修复或不修复。

4. 封闭：滴加用稀释后的正常兔血清封闭液(稀释比1:10)，37℃孵育30分钟，甩干，勿洗。

5. 滴加一抗(人IgG)，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5分钟×3次。

6. 滴加生物素化兔抗人IgG，37℃孵育30分钟。PBS 冲洗，5分钟×3次。

7. 滴加SABC-FITC(参考效价1:100)或SABC-POD(参考效价1:100)，37℃孵育30分钟。PBS冲洗，5分钟×3次。

8. 显色液显色，镜下控制反应时间。显色剂可选DAB(ZN1968)。自来水充分冲洗。

9. 根据需要进行苏木素(ZN1971)复染，染色时间为0.5-2分钟。选用中性树胶，水溶性封片剂(ZN2946)或抗荧光衰减封片剂(ZN1974)封片。

10. 结果观察。荧光显微镜下有黄绿色颗粒者为阳性染色。普通光学显微镜下有棕黄色颗粒者为阳性染色。



建议：

1. 热修复可选用枸橼酸盐缓冲液(ZN1955)、EDTA抗原修复液(ZN1951)、PBS缓冲液、TBS缓冲液(ZN1953)等作为抗原修复液。

2. 酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、抗原修复液Ⅰ(ZN1954，与热修复配合使用)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。



根据您的关注的双显色抗人IgG免疫组化试剂盒(POD和FITC)，您可能还对以下产品有需求：







名称：高灵敏ECL化学发光试剂盒

货号：YT060

规格：共100ml

本Western萤光检测试剂是一种超敏ECL化学发光试剂盒，可与二抗上耦连的辣根过氧化物酶发生化学反应，发出萤光，从而可以通过用X光片压片或其它适当萤光成像设备检测样品。



本试剂盒灵敏度极高，比DAB显色的灵敏度至少高200倍，是进口品Pai同类产品的几倍甚至几十上百倍。



本试剂系统发光时间长。在100微升1微克/毫升辣根过氧化物酶标记IgG中，加入100微升本试剂盒的工作液或Pierce公司的SuperSignal West Pico Substrate工作液进行检测。在暗房中，两者均可发出肉眼可见的蓝色萤光，但加入本试剂盒工作液的试管内的亮度明显高很多。zuì初数分钟内加入本试剂盒工作液的试管发光强度是加入SuperSignal West Pico Substrate工作液的试管的3倍。约30分钟后，加入本试剂盒工作液的试管仍然可以发出肉眼可见的较强的蓝色萤光，而加入Pierce公司的SuperSignal West Pico Substrate工作液的试管发出的萤光已经很难用肉眼进行分辨，定量结果显示此时加入本试剂盒工作液的试管发光强度是加入SuperSignal West Pico Substrate工作液的试管的100倍以上。



本试剂盒的高灵敏度可以大大节省宝贵的样品以及非常昂贵的一抗和二抗的用量。同时必须注意适当减少一抗和二抗或样品的用量，以免获得过深的难以比较灰度的条带。



本试剂盒采用全新配方，更加稳定。本试剂盒的两种试剂37℃水浴孵育30天，和4℃保存的试剂相比，对相同样品的检测效果无任何明显差异。此外本试剂盒背景很低，对PVDF膜和硝酸纤维素膜均适用。



储存条件：4℃避光，有效期一年。



名称：Western一抗二抗清除剂(强碱性)

货号：YT071

规格：250ml

本品用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为参照，或检测其它蛋白进行比较。通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。



使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜，会导致蛋白信号的减弱。但是，本Western一抗二抗去除液，经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用膜3-5次。使用本试剂只需大约15-20分钟即可实现蛋白膜的重复使用，然后可以进行封闭等后续的Western操作。



百奥莱博的不同的Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合，同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。



抗体清除剂选型表：

产品编号	YT071	YT072	YT073	YT074
产品名称	Western一抗二抗清除剂(强碱性)	Western一抗二抗清除剂(弱碱性)	Western一抗二抗清除剂(中性)	Western一抗二抗清除剂(酸性)
产品包装	250ml	250ml	250ml	250ml
pH	强碱性	弱碱性	中性	酸性
对于膜上蛋白的保留效果	好	好	好	好
对于一抗二抗的去除效果	好	好	好	好
去除一抗二抗所需时间	15-20分钟	20-30分钟	20-30分钟	40-80分钟
适用膜的类型	PVDF和NC	PVDF和NC	仅PVDF	PVDF和NC
腐蚀性	强	弱	无	弱

用于普通的Western检测时蛋白膜上一抗二抗的去除可以任选一种去除液。如果是NC膜，即硝酸纤维素膜时，不宜选用YT071N。从时间角度考虑，强碱性、弱碱性和中性的去除液所需的时间都比较短，可以优先考虑。从价格因素考虑，强碱性的去除液性价比zuì高。从安全性考虑，中性的去除液由于没有腐蚀性而表现出更高的安全性。弱碱性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正确操作，并进行适当防护，使用强碱性的一抗二抗去除液也是完全可行的。

  对于特定的抗原和抗体，很难说哪一种Western一抗二抗去除液的效果zuì好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳时，可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间，同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。同时也可以考虑尝试其它的一抗二抗去除液，以摸索出zuì佳的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。



注意事项：

1. 使用辣根过氧化物酶(HRP)，任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶，如果使用碱性磷酸酯酶，任何一次封闭都应当使用酪蛋白。

2. 为取得zuì佳效果，推荐使用PVDF膜。但硝酸纤维素膜也可以使用本Western一抗二抗去除液。

3. 使用化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测，例如DAB，NBT/BCIP，不适用于本试剂。

4. 本Western一抗二抗去除液有轻微腐蚀性，使用时请注意防护。



储存条件：室温，有效期一年。



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