WH0156 高通量96孔板质粒快速提取试剂盒

特别提示：包括高通量96孔板质粒快速提取试剂盒（醇沉淀法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：高通量96孔板质粒快速提取试剂盒（醇沉淀法)

英文名称：96wells Plasmid Fast Extraction Kit

产品货号：WH0156

产品规格：4×96孔|24×96孔板



本试剂盒通过异丙醇沉淀的原理纯化得到质粒DNA。本试剂盒采用本公司特制的96孔过滤板和溶液III能够快速GX的提取到高纯度的质粒DNA。适用于高通量质粒的快速制备，每孔处理1.3ml高拷贝质粒菌液，快速完成96个样本的质粒DNA提取，每孔zuì大产量为10-20μg（产量与质粒拷贝数、细菌状态等因素有关）。使用该试剂盒提取的质粒DNA可用于限制性酶切、测序、文库筛选，连接和转化等分子生物学实验。



产品特点：

·方便简捷：可在2-3小时内完成96个样品的提取。

·配备了独特的BaiRed试剂，可以清晰辨明质粒裂解过程中裂解程度。

·纯度高：可直接用于下游实验。



提取流程：

组分	4板	24板
溶液P1	125ml	3×240ml
溶液P2	125ml	3×240ml
溶液III	125ml	3×240ml
洗脱缓冲液TB	60ml	240ml
BaiRed	700μl	4×1ml
RNase A（10mg/ml)	1.25ml	6×1.25ml
半裙边96孔过滤板	4个	24个
96孔深孔板	8个	48个
封口膜	26张	150张
透气膜	5张	25张

储存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃，2-8℃保存条件下若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。溶液P1加入RNase A后，应置于2-8℃保存，可稳定保存12个月。单独包装的RNase A可在室温保存12个月。



注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1．96孔板细菌培养方法：将含相应抗生素的培养基加入96孔深孔板中，每孔添加1.0-1.3ml培养基且挑取单克隆摇菌，加盖透气膜封板以防污染，在220-280rpm 37℃条件下培养20-24h。

2．溶液P1使用前先加入RNase A （请分批配制，每125 ml P1加入1.25 ml RNase A （10mg/ml），可用于4板提取反应），混匀，置于2-8℃保存。

3．每次使用前取50 ml漂洗液PW并加入200 ml无水乙醇摇匀后使用。

4．使用前先检查平衡液BL、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可置于37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。溶液P2和P3使用后应立即盖紧盖子。

5．所有离心步骤均为室温下进行离心。

6．提取的质粒量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关。

7．实验前使用平衡液处理吸附板，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。

8．用平衡液处理过的吸附板zuì好当天使用，放置时间过长会影响提取效果。



BaiRed使用方法：

BaiRed是一种颜色指示剂，用以指示整个操作的正确性，不影响任何下游实验且对人体无害。为可选试剂，客户根据需求选择是否添加。



使用方法：若选择添加，则在使用之前按BaiRed:P1=1:200进行添加，颠倒混匀至完全匀相。在使用时添加BaiRed的P1溶液为红色；添加P2之后红色完全变为紫色说明充分裂解；再添加P3溶液之后匀相状态为黄色说明中和复性充分。



操作步骤：（离心法)

1．平衡96孔吸附板：将96孔吸附板CP3和96孔深孔板叠放在一起，向吸附板中每孔加入500μl的平衡液BL，3,600 rpm（～2,130×g)离心3 min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。（请使用当天处理过的吸附板）。

2．集菌步骤：向一个新的96孔深孔板中添加1.0-1.3ml摇好的菌液（或者取摇好菌液的96孔板），加盖封口膜，3,600 rpm（～2,130×g)离心10min收集菌体，倒掉培养基，倒扣于吸水纸上除去残留的培养基（如果菌体浓度较低，可以重复集菌一次）。

3．向每孔收集好的细菌培养物中加入250 μl溶液P1 （请先检查是否已加入RNase A)，加盖封口膜，使用漩涡混合器彻底悬浮菌体。

  注意：若溶液P1添加BaiRed试剂，则此时为红色。

4．揭去封口膜，向96孔深孔板中每孔加入250 μl溶液P2，加盖新的封口膜，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解，瞬时离心使封口膜上的水珠落回板中。

  注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，若使用BaiRed试剂，完全混匀时颜色为紫色，若裂解不充分会有部分红色残留。混匀后菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。

5．揭去封口膜，向96孔深孔板中每孔加入350 μl溶液P3，加盖新的封口膜，立即温和地上下翻转6-8次使其充分混匀。

  注意：溶液P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。若使用了BaiRed试剂，完全混匀应从紫色变为黄色。

6．将96孔过滤板和一个新的96孔深孔板叠放在一起，取750 μl上步得到的裂解溶液转入对应的96孔过滤板中（过滤板的承载量为750 μl），3,600 rpm（～2,130×g)离心5 min。

7．将过滤液全部转入第1步平衡好的96孔吸附板CP3中（96孔吸附板CP3叠放在收集废液的96孔深孔板上），3,600 rpm（～2,130×g)离心5 min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。

8．可选步骤：向吸附板CP3每孔中加入500μl去蛋白液PD，3,600 rpm（～2,130×g)离心5min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。

  注意：如果宿主菌是end A＋宿主菌（TG1,BL21,HB101,JM系列等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，强烈推荐采用此步。

     如果宿主菌是end A－宿主菌（DH5α，TOP10等），这步可省略。

9．向96孔吸附板CP3每孔中加入700 μl漂洗液PW （请先检查是否已加入无水乙醇），3,600 rpm（～2,130×g)离心5 min，倒掉收集板中的废液。

10．重复操作步骤9。

11．将96孔吸附板CP3叠放在96孔深孔板上，置于3,600 rpm（～2,130×g)离心10min，目的是将吸附板中残余的漂洗液去除。

  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。

12．将吸附板CP3放入新的96孔深孔板中，使用排枪向96孔CP3吸附膜的中间部位悬空滴加80-100 μl洗脱缓冲液TB或ddH2O（pH≥7.5)，室温放置5-6min，3,600 rpm（～2,130×g)离心10min将质粒溶液收集到收集板中。

  注意：通常100 μl的洗脱液在洗脱后能回收到平均55 μl的DNA产物。为增加核酸的得率，可以适当增加洗脱液的体积（比如采用120 μl洗脱液进行洗脱）。此外，洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。



操作步骤：（负压法)

1．平衡96孔吸附板CP3：将96孔吸附板CP3放入负压装置中，每孔加入500μl的平衡液BL，开启并调节负压，抽掉吸附板中的溶液。（请使用当天处理过的吸附板）

2．以下步骤同（一）离心法中的第2-5步骤操作方法。

3．接（一）离心法第5步骤之后，将96孔过滤板和第1步平衡好的96孔吸附板CP3叠放后置于负压装备上，过滤板每一个孔需对应吸附板的每一个孔。

  注意：此步操作应按照各种品Pai的负压装置要求进行操作。

4．取上步得到的裂解溶液750 μl左右，转入对应的96孔过滤板中（过滤板的承载量为750μl），调节负压抽干溶液。

5．可选步骤：向吸附板CP3每孔中加入500μl去蛋白液PD，调节负压抽干溶液。

  注意：如果宿主菌是end A＋宿主菌（TG1,BL21,HB101,JM系列等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，强烈推荐采用此步。如果宿主菌是end A－宿主菌（DH5α,TOP10等），这步可省略。

6．向96孔吸附板CP3每孔中加700 μl漂洗液PW，调节负压抽干溶液。

7．重复步骤6。

8．使用zuì大负压继续抽10min，以彻底抽干吸附材料中残余的漂洗液。若柱尾仍然含有水珠用吸水纸吸干即可。

9．将吸附板CP3放入一个新的96孔深孔板中，使用排枪向96孔CP3吸附膜的中间部位悬空滴加80-100 μl洗脱缓冲液TB或ddH20（pH≥7.5)，室温放置5-6 min，3,600 rpm（～2,130×g)离心10min将质粒溶液收集到深孔板中。



DNA浓度及纯度检测：

1．DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约双链DNA 50 μg/ml、单链DNA40 μg/ml。OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9。



根据您的关注的高通量96孔板质粒快速提取试剂盒（醇沉淀法)，质粒大规模提取试剂盒，您可能还对以下产品有需求：







名称：非冻型组织DNA保存液

货号：BTN3660

规格：250mL

本品是我公司推出的在室温条件下长期保存DNA样品的保存液。它能迅速渗入细胞内，通过GXYZDNase的活性而长期保证DNA的完整性。



产品特点：

1. 保存时间长，可室温保存动植物组织长达两年，保护DNA不被降解。

2. 安全可靠，本产品无害，从DNA保存液保存的样品中提得的DNA可用于酶切和PCR等分子生物学实验。

3. 使用简单，直接把新鲜的动植物样品浸在DNA保存液中即可。

4.可广泛用于各种动植物标本的野外采集。



储存条件：室温运输及保存，有效期两年。



使用方法：



步：准备工作

1.估计完全浸没样品所需要Tissue DNA保存液的体积。

注：1g 组织约需10mL Tissue DNA保存液。

2.标记收集管并加入估计所需量的Tissue DNA保存液。



第二步：样品的处理

1.以zuì快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。

注：鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切而直接放入本产品中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。

2.将组织碎块完全浸没于收集管的Tissue DNA保存液中。



第三步：样品的存放

将收集管存放于温度适当的地方，保存温度不要低于4℃。



第四步：样品的使用

1.从存放处取出样品，用消过毒的镊子将组织碎块从保护液中取出。

2.立即开始DNA提取。



名称：柱式尿液DNA提取试剂盒

货号：BTN90314

规格：50次

尿液中的DNA主要是来自于尿道中脱落的细胞，用尿液DNA进行分子生物学基础研究和临床诊断有很多特殊的优点：

1)尿液收集物是非介入、无创伤性的。

2)从尿液中提取DNA要比从血液中提取DNA更加简单。本产品就是专门用于从尿液中提取基因组DNA的产品，提取的DNA可直接用于PCR反应。



产品特点：

1.操作简单，整个过程室温操作约20分钟，适合大规模样品处理。

2.DNA产率女性一般为53-200ng/mL尿液，男性一般为3-50ng/mL尿液。

3.所提取的DNA纯净，可直接用于PCR、DNA甲基化鉴定、癌症检测等。

4.安全，本试剂盒对人体，无腐蚀性和刺激性气味。

5.性价比高，质量和国外同类产品相当，但价格更便宜。



试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	20mL
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50mL
通用洗脱液	5mL
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。



使用方法：

1.收集1.5-50mL尿液样品到适当的离心管中，室温2000rpm离心10分钟。

2.小心吸弃上清，加入300μL溶液A，漩涡震荡，直到溶液变得澄清。

3.将液体转移到离心吸附柱中并静置2-5分钟，以使DNA与膜充分结合。

4.12000rpm离心半分钟，DNA将吸附到膜上，弃收集管中的废液。

5.加入0.7mL的通用洗柱液，12000rpm离心半分钟，弃收集管中的废液。

6.加入0.3mL的通用洗柱液，12000rpm离心半分钟，弃收集管中的废液。

7.12000rpm离心半分钟，甩干残留液体。此步很重要，以去除膜上残留通用洗柱液，否则会影响后续反应。

8.将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管(自备)中，加入30μL通用洗脱液，室温放置2分钟。如果将通用洗脱液在65℃预热后再使用，洗脱DNA的效果会更好。

9.12000rpm离心半分钟，离心管底溶液即DNA溶液。可以立即使用或放冰箱长期保存。