WE0163 高纯质粒中提试剂盒

特别提示：包括高纯质粒中提试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：高纯质粒中提试剂盒

英文名称：PlaPure Midi Extraction Kit

产品货号：WE0163

产品规格：50次



  本试剂盒提供一种简单、快捷、GX的提取质粒的方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方，通过离心吸附柱在高盐状态下GX专一的结合溶液中的质粒DNA，经过两步洗涤，一步洗脱，zuì大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。



试剂盒组成：

组份	50次
Buffer P1	30ml
Buffer P2	30ml
Buffer N3	40ml
Buffer PB	10ml
Buffer PW(浓缩液)	10ml
Buffer EB	10ml
RNase A(10 mg/ml)	600μl
吸附柱DL及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇。



实验前准备及重要注意事项：

1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。

2、次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。

3、次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

4、使用前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。

5、注意不要直接接触Buffer P2 和Buffer N3，使用后应立即盖紧盖子。

6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

7、所有离心步骤均可在室温下进行。



操作步骤：

1、取5-15ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。

注意：质粒拷贝数较低或>10 kb时，可以使用更多菌液通过二次离心将菌体沉淀收集到同一个离心管中，同时后续所加试剂Buffer P1、P2及N3的量需加倍。所加试剂的量必须能够充分裂解菌体，菌体过多、裂解不充分都会降低质粒的提取效率。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入500μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，导致提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入500μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6-8次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。。

注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。并且此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入700μl Buffer N3，立即上下颠倒混匀6-8次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。13000rpm离心10分钟。

注意：Buffer N3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。

5、将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱DL中，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：吸附柱的zuì大容积为750μl，如果样品体积大于750μl可分批加入。

6、向吸附柱中加入150μl Buffer PB，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。

8、将吸附柱重新放回收集管中，13000rpm离心1分钟。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。

9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附膜中间部位加入100-200μl Buffer EB，室温放置2-5分钟，13000rpm离心2分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。

注意：

1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，13000rpm离心2分钟。将质粒溶液收集到离心管中。

2)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。

3)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Buffer EB在65-70℃水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。



储存条件：室温(15～30℃)



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名称：白细胞裂解液

货号：BTN130989

规格：250mL

本品为即用型白细胞裂解溶液，可以用于裂解分离纯化好的血液白细胞，用于DNA提取、RNA提取等后续实验。



储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。



使用方法：(以DNA提取为例)

1. 取新鲜抗凝血5mL，在10mL或15mL的塑料离心管中用红细胞裂解液裂解红细胞(红细胞裂解液有几种配方，用户需要根据所选产品的使用手册进行操作，这里不列出每种的详细步骤)，也可以直接2500rpm离心5分钟后取白细胞层到一新的10mL或15mL的塑料离心管中。

2.在所得的白细胞沉淀中或所得白细胞层溶液中加自备的生理盐水使得白细胞的终体积为2mL。

3. 加1mL的本产品，混匀后55℃ 保温3小时，其间轻轻振摇数次。

4. 加入3mL自备的Tris饱和酚，轻轻震摇5分钟，使得水相和酚相充分分开。

5. 3500rpm离心15分钟，上层水相含DNA，中间白色层为蛋白质，下层为酚相。

6. 将非常粘稠的含DNA的上清液转移到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。

7. 再用Tris饱和酚重复上面的抽提步骤，直到离心后中间层没有白色的蛋白出现为止。

8.在上清液中加入等体积的自备的lǜ仿，轻轻震摇5分钟，3500rpm离心5分钟，转移上清液到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。此步可以除去残留的酚。

9.在上清液中加入0.1倍体积的自备的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)和2倍体积的无水乙醇，轻柔颠倒混匀，将出现絮状的DNA沉淀。

10. 用移液枪头将DNA沉淀挑取出来，转移到1.5mL的塑料离心管中，用75%的乙醇浸泡2次。此操作可以去除DNA中残留的盐离子。

11.转移DNA沉淀到一个1.5mL的塑料离心管中，空气中放置10分钟左右待乙醇挥发后，加入0.5mL自备的TE缓冲液溶解DNA，4℃放置待用。



名称：非冻型血液DNA保存液

货号：BTN60910

规格：250mL

本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并GXYZDNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。



产品特点：

1. 保存时间长，可常温保存血液DNA 长达六个月，尤其适合于野外血液样品采集。

2. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb之间。

3. DNA 无化学修饰，提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。

4.适用于各种动物血液(包括禽类血液)。

5. 安全可靠，本产品无害。

6. 使用简单，直接把新鲜的血液样品与本产品混合即可。



储存条件：室温运输及保存，有效期两年。



使用方法：



一: 哺乳动物血液(包括人血液)

1. 将抗凝血(1-10mL)加入到适当容量的塑料离心管中。

2. 加入等体积的血液DNAhold，充分振荡混合均匀。

3. 常温闭光保存直到使用。

4. 提取DNA时，可以取出部分液体，用自备的蛋白酶K(终浓度为0.1mg/mL)37℃处理过夜，然后再用经典的酚/lǜ仿抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。



二: 禽类血液

由于禽类血液有核细胞量远高于哺乳动物，血液的使用量很少，一般只有哺乳动物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等体积的水将血液DNAhold稀释，然后直接将禽类血液加入。其余操作同上。