特别提示:包括高通量96孔板植物基因组DNA提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:高通量96孔板植物基因组DNA提取试剂盒
英文名称:96wells Plant Genomic DNA Extraction Kit
产品货号:WH0153
产品规格:2×96孔
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附板和独特的缓冲液系统,用于提取植物细胞中的基因组DNA。离心吸附板中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,GX、专一吸附DNA,可zuì大限度去除植物细胞中杂质蛋白及其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、qPCR文库构建、Southern杂交等实验。
产品特点:
·操作便捷:90min内即可获得高品质基因组DNA。
·普适性广:特别适合于富含多糖多酚植物和植物干粉。
·产物纯度高,质量好:纯化过的基因组DNA可直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。
·自动化:可配合大部分核酸自动纯化仪。
组分 | 规格 | 缓冲液GP1 | 160ml | 缓冲液GP2 | 160ml | 缓冲液GD | 52ml | 漂洗液PW | 50ml | 洗脱缓冲液TE | 60ml | 半裙边96孔吸附板CB3 | 2块 | 96孔深孔板 | 6块 | 封口膜 | 12张 |
储存条件:室温(15-25℃)干燥条件下可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。在2-8℃保存条件下,若产生沉淀,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。
注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小、提取量也下降。
2.若缓冲液GP1和GP2中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,并摇匀后使用。
3.所有的离心步骤均为使用台式离心机在室温下进行。
4.不同来源的植物组织材料中提取的DNA的量会有差异,100mg植物组织可提取3~30μg DNA。
操作步骤:
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1.取植物新鲜组织约100mg或干重组织约30 mg,加入液氮充分研磨。
2.将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700μl 65℃预热缓冲液GP1的离心管中(实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇,使其终浓度为0.1%),迅速颠倒混匀后,将离心管放在65℃水浴20 min,水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3.加入700μl氯fǎng,充分混匀,12000rpm (~13400×g )离心5 min。
注:若提取富含多酚或淀粉的植物组织,可在第3步前,用酚:氯fǎng/1:1进行等体积抽提。
4.小心地将上一步所得上层水相转入一个96孔深孔板中,加入700μl缓冲液GP2,充分混匀。
5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个96孔吸附板CB3中(吸附板已放置在96孔深孔板上),3600rpm(~2,130×g)离心5 min,倒掉废液,吸附板CB3重新放回96孔深孔板。
6.向96孔吸附板CB3中加入600 μl漂洗液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),3600rpm(~2,130×g)离心5 min,倒掉废液,将96孔吸附板CB3重新放回96孔深孔板。
7.向吸附板CB3中加入600 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),3600rpm(~2,130×g)离心5 min,倒掉废液,将96孔吸附板CB3重新放回96孔深孔板。
8.向吸附板CB3中加入600 μl漂洗液PW,3600rpm(~2,130×g)离心5 min,倒掉废液。
注意:如果吸附板膜呈现绿色,向吸附板CB3中加入500 μl无水乙醇,3600rpm(~2,130×g)离心5 min,倒掉废液,将吸附板CB3放回96孔深孔板。
9.将96孔吸附板CB3放回96孔深孔板中,3600rpm(~2,130×g)离心5 min,倒掉废液。将96孔吸附板CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将96孔吸附板中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
10.将96孔吸附板CB3转入一个干净的96孔深孔板中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min,3600rpm(~2,130×g)离心8 min,将溶液收集到96孔深孔板中。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率,可将收集得到的溶液再加入吸附板CB3中,室温放置2 min,3,600 rpm (~2,130×g)离心5-8 min。
DNA浓度及纯度检测:
1.得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2.DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3.OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH2O,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
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本试剂盒是凝固血液DNA提取试剂盒(BTN71002)的升级产品,专门用于从新鲜或冻存的凝固全血(包括人和禽类)中提取基因组DNA。
产品特点:
1. DNA更加纯净,OD260/280在1.8-2.0之间,可直接用于PCR、酶切、杂交等。
2. 操作更加简单快捷,比凝固血液DNA提取试剂盒快十分钟以上。
3. 每克新鲜凝固全血DNA产量为20-50μg DNA。
4. 安全,本试剂盒对人体,无腐蚀性和刺激性气味。
试剂盒组成:
成分 | 规格 | 溶液A | 50ml | 溶液B | 50ml | 溶液C | 50ml | 离心吸附柱 | 50套 | 通用洗柱液 | 50ml | DNA洗脱液 | 10ml | 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 65℃预热溶液A,待其沉淀溶化后,充分混匀,取1mL到10mL或15mL塑料离心管中并将离心管放置于65℃待用。
2. 称取凝固血液0.1-0.5 g,加入到预热的溶液A中短暂匀浆。匀浆过程中将产生大量泡沫,属于正常现象。
注意:如果是干的血块,用量不要超过0.2g,但需将干血块剪成微小的碎片。
3. 将匀浆液置于65℃水浴保温5分钟,然后将不超过0.75mL的匀浆液上清转移到新的1.5mL离心管中。
注意:尽量不要转移凝固血液碎片。
4.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀后冰浴5分钟。
5. 12000~15000g室温离心3分钟,将上清液转移到新的1.5mL离心管中。
注意:如果上清液呈红色,属于正常现象。
6. 加入0.2mL的自备氯fǎng,震荡器上充分振荡30秒混匀。
7. 12000~15000g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物。将不超过0.6mL的上清液小心转移到新的1.5mL离心管中。
8. 加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀后分两次转移到离心吸附柱中,每次转移后需要12000~15000g离心半分钟并弃穿透液。
9.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液,12000~15000g离心半分钟。
10.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液,12000~15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤,一般可以省略)。
11. 12000~15000g离心半分钟以去除残留通用洗柱液。注意:此步不能省略,否则残留的通用洗柱液会影响DNA的后续反应。
12. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中,加入100μL 通用洗脱液,12000~15000g离心半分钟,管底溶液即DNA溶液,可立即使用或放冰箱长期保存。
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