定点突变
定义:通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、GX的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征,是基因研究工作中一种非常有用的手段。
一般实验流程:
定点突变一般须有含有待突变基因的高纯度质粒,不少于10μg,电泳图清晰,达酶切及测序要求;
1.对待突变基因测序结果进行分析,设计突变方案;
2.根据突变方案设计合成覆盖突变位点的双向引物,合成目的DNA两端引物,进行高保真PCR反应;
3.默认情况下,将PCR产物克隆至T载,或者根据要求亚克隆至目的载体;DNA测序验证突变序列的正确性。