测序原理
Illumina HiSeq2000测序技术采用独特的边合成边测序技术和可逆中止化合物染料技术,提供高通量,高精确度,低成本的基因组测序。其原理是基于DNA单分子簇的边合成边测序技术,和专有的可逆终止化学反应原理。测序时将基因组DNA的随机片段附着到光学透明的玻璃表面(即Flow cell),这些DNA片段经过延伸和桥式扩增后,在Flow cell上形成了数以亿计Cluster,每个Cluster是具有数千份相同模板DNA的单分子簇。然后利用带荧光基团的四种特殊脱氧核糖核苷酸,通过可逆性终止的SBS(边合成边测序)技术对待测的模板DNA进行测序。这种方法确保了高精确度和高顺序性,为同聚物和重复序列的测序提供了一个很好的解决方案。利用HiSeq测序技术对基因组进行测序和注释的同时,也可对基因表达调控,基因功能,蛋白/核酸相互作用展开研究。
技术特点
高通量:能够在单次运行中产生600 Gb的数据,每天产生55 Gb;单个读取/末端配对读取(Z多):300亿/600亿碱基;
低成本:单次运行即可以约30倍的覆盖度同时对两个人类基因组进行测序,或同时绘制200个基因表达谱;
通量可调: 每张芯片有8个通道,每个通道可单独运行一个样品或者多个样品(用barcode标记);
无需传统建库,自动化样品制备,简单,成本低。
应用领域
基因组测序、基因调控分析、外显子组测序、RNA-Seq、小RNA测序、SNP发现与结构变异分析、细胞遗传学分析、ChIP-Seq、甲基化测序等。