Terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)

 概述
  TdT（末端脱氧核苷酸转移酶，Terminal deoxynucleotidyl transferase)是一种无需模板的DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3' 羟基端，带有突出、凹陷或平滑末端的单、双链DNA分子均可作为TdT 的底物。
 
应用

来源
  大肠杆菌细胞，含有编码牛胸腺末端脱氧核苷酸转移酶的基因。
活性单位定义
   一个单位是指在37℃、60min内将1nmol脱氧核糖核酸掺入多聚核苷酸片段（吸附在DE-81上）所需的酶量。
5×TdT Buffer
  1 Mpotassium cacodylate,125mM Tris, 0.05% Triton X-100, 5mM CoCl2。
反应条件
  1×TdT Buffer，37℃温育。

质量控制
  1.双链内切脱氧核糖核酸酶检测：50μl反应体系中，1μl酶和1μg pUC57，37℃孵育4h，0.8%琼脂糖凝胶检测。结果显示无切口或线性DNA存在，表明该产品通过此项测试。
  2.内切及外切脱氧核糖核酸酶活性检测：20μl反应体系中，包含200ng双链的寡核苷酸，1μl酶，37℃孵育4h，反应产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并成像分析实验结果。结果显示寡核苷酸没有降解，表明该产品通过此项测试。
  3.DNA 末端完整性和克隆效率污染活性的检测：将200ng pUC57酶切片段混合物（pUC57/HindⅢ，pUC57/PstⅠ，pUC57/SmaⅠ），1μl酶，37℃孵育40h，转化后进行蓝白斑筛选。白斑比例低于3%时，产品合格。